色谱理论总述.ppt

★内标法 当只需测定试样中某几个组分，或试样中所有组分不可能全部出峰时，可采用内标法。 内标法是将一定质量的纯物质(非被测组分的纯物质)作为内标物，加入到准确称取的试样中，根据被测物质和内标物的质量及其在色谱图上相应峰面积之比，求出被测组分的质量分数。 设样品的质量为m，则待测组分i的质量分数为 选择内标物应遵循的原则： 试样中不存在的纯物质，否则会使色谱峰重叠而无法准确测定试样的色谱峰面积； 内标物的物理及物理化学性质应与被测物相近，当操作条件发生变化时，内标物与被测物均受到相应的影响两者相对校正因子基本不变； 色谱峰位于被测物色谱峰的附近，且能与被测物色谱峰完全分离； 内标物的浓度应与被测物的浓度相近。 例4.2.9 取二甲苯生产母液1500mg，母液中合有乙苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯及溶剂和少量苯甲酸，其中苯甲酸不能出峰。以150mg壬烷作内标物，测得有关数据如下： 物质 壬烷 乙苯 对二甲苯 间二甲苯 邻二甲苯 Ai/cm2 98 70 95 120 80 f`m 1.02 0.97 1.00 0.96 0.98 求各组分的含量。 解：母液中苯甲酸不能出峰，所以只能用内标法计算。由各组分的绝对校正因子计算得壬烷、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯的相对校正因子分别为1.00，0.95，0.98，0.94，0.96。 根据内标法计算公式，对于乙苯有： 同样可以计算出对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯的质量分数分别为9.5%，11.5%，7.84%。 内标法的优点：不要求各组分全部出峰，无归一化法的限制，即只要被测组分能出峰，不和其他峰重叠，不管其他组分是否出峰或是否重叠，都可以用内标法进行定量分析，而且定量准确，受操作条件影响较小。 缺点：选用合适的内标物较为困难，每次都要淮确称量样品和内标物的量，不宜作快速分析。 ★内标标准曲线法 从内标公式可知： 如果每次称取同样量(m)的试样，每次加入相等量(ms)的内标物，则上式中m，ms均为常数，计算公式可写为： 三、高效液相色谱分析 High Performence Liquid Chro-matography, HPLC 气相色谱法适用于分析相对分子质量较小、沸点较低、热稳定性好的物质，这些物质约占有机化合物总数的25%～30%。 对于稳定性差、相对分子质量大(400以上)、沸点高的物质，宜用高效液相色谱法进行分析。 高效液相色谱法是用液体作为流动相的色谱法。 现代高效液相色谱法具有下列特点： (1)高压：液相色谱法使用液体作为流动相(简称载液)，液体流过色谱柱时，所遇到的阻力很大，为了使载液迅速通过色谱柱，必须对载液施加高压。高效液相色谱法工作压力高达20MPa~30MPa。 (2)高速：高效液相色谱法的分析时间较经典的液相色谱所需的时间要少得多，分离一个样品只需几分钟至几十分钟，仅为经典液相色谱的几十分之一。 (3)高效：一般气相色谱法的色谱往是数千塔板／米，高效液相色谱法的塔板数可达约3万塔板/米，使分离效率大大提高。 三、高效液相色谱分析 High Performence Liquid Chro-matography, HPLC 气相色谱法适用于分析相对分子质量较小、沸点较低、热稳定性好的物质，这些物质约占有机化合物总数的25%～30%。 对于稳定性差、相对分子质量大(400以上)、沸点高的物质，宜用高效液相色谱法进行分析。 高效液相色谱法是用液体作为流动相的色谱法。 ②色谱分离基本方程式 由上式可知： (1)增加塔板数可以提高分离度 (2)k值的最佳范围是：1＜k＜10 (3)相对保留值γ增大，能显著地提高分离度 两根同种色谱柱的相互关系式： 例4.2.3 如果柱长L2为1m时，分离度及为0.8，要实现完全分离(R＝1.5)，色谱柱Ll至少应有多长? 答：色谱柱至少应有3.52m长。 例4.2.4 用3m长的填充 柱得到如图4.2.6所示的色谱流出曲线，为了得到R＝1.5的分辨率，填充柱最短需要多少米? 塔板高度为： 代入公式，得： 解： 2.分离条件的选择 ①载气及其最佳流速的选择 ★ 载气的选择 热导池检测器常用氢气、氦气作载气 氢火焰检测器宜用氮气作载 ★载气流速的选择 范第姆特方程式H=A+B/U+CU中，A，B，C与载气线速度无关。 载气的最佳流速： ②柱温的选择 柱温改变时，柱效率、分离度R、选择性及色谱柱的稳定性都将产生相应的改变。 ③汽化温度的选择 比汽化室高