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中文摘要 IMB联合SEM、LSM检测乳腺癌骨髓微转移 摘 要 目的：恶性肿瘤的一个重要标志是转移，转移是导致恶 性肿瘤患者最终治疗失败的主要原因。乳腺癌是妇女最常见 的恶性肿瘤，虽然采取了以手术为主的综合治疗措施，但远 期生存率并没有获得明显提高，影响预后的主要因素是发生 了远处器官的转移。临床发现，约25～30％腋淋巴结阴性患 者于术后5年内出现远处转移而导致治疗失败。因此，对于 远处转移的早期检测及治疗成为提高乳腺癌患者远期生存 率的途径之一。骨髓是乳腺癌最易发生远处转移的部位，骨 marrow 髓微转移(bone 抽吸或活检标本中检出了肿瘤细胞，而患者无任何临床、影 像学上远处或骨髓转移的证据，它常以单个细胞或微小细胞 团形式存在。如果能在早期检测到微小转移灶，则对疾病的 分期、治疗、判断并改善预后具有重要意义。 乳腺癌骨髓微转移检测方法很多，如免疫细胞化学技 术、流式细胞技术、分子生物学技术等，这些方法取得了令 人欣慰的结果，体现了潜在的应用价值，但都存在一定的局 限性，如肿瘤细胞表面抗原表达不均一、假性基因的存在、 约2～10％的抗膜抗体对健康人骨髓细胞有抗原反应等，都可 能会导致假阳性结果，并且这些方法多不能从形态学上证实 肿瘤细胞的存在。本研究利用包备有抗上皮细胞粘附因子的 celladhesionmolecule— 纳米级免疫磁珠(anti．epithelial immunomagnetic 中文摘要 髓中转移的肿瘤细胞，将富集后细胞通过扫描电镜(scanning electron 同时用结合异硫氰酸荧光素的抗细胞角蛋白抗体 (anti．cytokeratin．fluorescein 记富集后细胞，在激光共聚焦显微镜(1aser scanning 避免了由于交叉反应所造成的假阳性，同时从形态学上证实 了肿瘤细胞的存在，进一步探讨乳腺癌BMM与影响乳腺癌 预后的临床因素、病理因素的关系，明确乳腺癌BMM与预 后的关系，为临床制定合理的治疗方案、评价预后提供理论 依据。 方法：本研究随机取自2006年3月至10月在我院所收治 经病理证实乳腺癌患者45例，健康志愿者4例(49例均已在 骨髓穿刺知情同意书上签字)。研究对象均为女性，年龄30～ 67岁，平均49．8岁。术前在局部浸润麻醉下，髂前上棘行骨 髓穿刺，抽取骨髓10～15ml，淋巴细胞分离液离心分层，收 集有核细胞，IMB富集阳性对照、阴性对照、乳腺癌患者骨 髓中转移的肿瘤细胞，将富集后细胞分成两等份，一份在 镜标本，SEM下采集标准肿瘤细胞图象。统计学方法：采用 准：P0．05有统计学意义。 结果：1．特异性检测：4份阳性对照在SEM、LSM下同 时检测到肿瘤细胞，4份阴性对照在SEM、LSM下均未检测 中文摘要 下同时检测到肿瘤细胞，BMM阳性检出率为35．6％。3．45例 乳腺癌BMM与原发肿瘤大小的关系：乳腺癌BMM阳性率随 着原发肿瘤增大而增高，肿瘤直径≤2cm组、2～5cm组及 的关系：乳腺癌BMM阳性率随着临床病理分期增加而增高， 腋窝淋巴结转移状况的关系：虽然腋淋巴结转移组BMM阳 0．053)。进一步分层研究发现，随着腋淋巴结转移数目增加 BMM阳性率增高，腋淋巴结转移数目／4个组BMM阳性率 为58．8％高于腋淋巴结转移数目l～3个组(25．O％)及无腋淋 月经状况的关系：本研究未发现乳腺癌BMM与年龄、月经 病理类型的关系：45ff0乳腺癌BMM阳性率随着组织学分级 增加而升高，组织学分化I级组BMM阳性率为9．1％低于II 的关系：乳腺癌BMM阳性率随着ER、PR蛋白表达增强而降 中文摘要 表达有关(胗0．05)。 阳性检出率为35．6％。4份阳性对照在SEM、LSM下同时检测 到肿瘤细胞，4份阴性对照在SEM、LSM下均未检测到肿瘤 细胞，本实验检测肿瘤细胞特异性为100％。2．乳腺癌BMM 与原发肿痛大小及临床病理TNM分期有关，肿瘤的侵袭转移 能力随着原发肿瘤增大而