脂联素基因多态及其血清水平与不同糖耐量人群的相关性研究.pdf

中文 摘 要 脂联素基因多态性及其血清水平与不同 糖耐量人群的相关性研究 摘 要 目的:随着肥胖人群数量的逐渐增多，与之密切相关的 2型糖尿病 (DM)、心脑血管疾病、高脂血症、高血压、脂 肪肝等的发病率也不断上升。有资料表明，中等肥胖者发展 为2型DM的机率为正常人的2倍，严重肥胖者可高达5-10 倍。2型DM人群中，80%以上的人伴有超重或肥胖。胰岛 素抵抗 O(R)是2型DM发病的重要病理、生理基础，贯穿 于其发生发展的整个过程，而肥胖者常常伴有外周组织胰岛 素敏感性的降低，并由此导致高胰岛素血症和IR，肥胖尤其 是腹型肥胖，参与了IR的形成，肥胖可独立引起或与DM 协同作用加重2型DM的IR。目前，肥胖导致IR的机制尚 未完全清楚。很多研究认为脂代谢紊乱、肿瘤坏死因子 a (TNF-a)、瘦素((leptin)等与肥胖者IR的发生有一定关系。 脂联素作为新近发现的一种脂肪细胞因子，其作用越来越受 到人们重视，正常人血中富含脂联素。研究表明脂联素具有 增加胰岛素敏感性、改善代谢和抗炎等生理作用，是糖尿病 发展中的一种保护因子。肥胖、胰岛素抵抗、2型DM患者 血清脂联素水平下降，并且低脂联素血症的程度与胰岛素抵 抗的程度相平行。分子生物学研究发现脂联素基因与 2型 DM的易感性相关连，该基因存在多个单核昔酸多态性位点， 其中脂联素十45位T/G多态性影响其基因表达及血清水平。 然而人们对此所做的研究还甚少。因此，本研究的目的是; 中 文 摘 要 通过检测不同糖耐量人群血清中脂联素水平及其基因型，以 明确脂联素在肥胖、胰岛素抵抗和2型DM发病中的作用及 脂联素基因多态性与糖尿病的关系，为阐明糖尿病发生的病 理生理学及遗传学机制提供理论依据。 方法 1.研究对象的选择:根据 1999年WHO提出的DM诊断 和分型标准，选择新确诊的2型DM病人 (DM组)104例， 糖耐量减低病人 (IGT组)46例，作为病例组。从常规体检 人群中选择无糖代谢紊乱个体90例 (NGT组)作为对照组。 各组按体重指数 (BMI)分成肥胖和非肥胖亚组。所有研究 对象均除外 (1)心肌病、心脏瓣膜病、心功能II级或以上; (2)’肾功能不全失代偿期 (血肌醉)178Amol/L)、明显肝 功能异常或有慢性迁延型肝炎病史;(3)妊娠、哺乳期或长 期服用避孕药。各组间性别、年龄均匹配，统计学处理无显 著性差异。 2.临床指标的测定:所有受试者均 (1)测量血压 (SBP/DBP)、身高、体重、腰围、臀围，计算 BMI及腰/ 臀比值 (WHR);(2)过夜 10小时以上无热量摄入，采肘静 脉血5m]，其中Iml用2%乙二胺乙酸 (EDTA)抗凝，保存 在一400C，用于抽提基因组DNA，余4ml常规分离血清，-40C 保存成批测定脂联素、空腹血糖 (FBG),胰岛素 (FINS), 血脂 (TG,TC,LDL-C,HDL-C)、肝功能、’肾功能;(3) 行75克口服葡萄糖耐量试验，测2小时血糖 ((PBG). 3.月旨联素基因型检测:(1)基因组DNA的提取:EDTA抗 凝血0.3m1，用碘化钾 (KI)法提取外周血白细胞DNA，紫 外分光光度法测定DNA的浓度和纯度。(2)聚合酶链反应一限 中文 摘 要 制性片段长度多态性 (PCR-RFLP)检测脂联素+45位T/G 基因多态性:以外周血白细胞基因组DNA为模板进行PCR 扩增，25川的反应体系中含基因组DNA约150ng，上下游 引物各1.211(IOpmmol/p,l),TagDNA聚合酶1.25U,dNTP 0.81.1(lOmmol/11)，与Taq酶相对应的IOXPCRBuffer3.511, 与Taq酶相对应的染料211，余双蒸水补足。PCR反应在热 循环仪上进行:95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，59C 退火30秒，72℃延伸30秒，重复完成32个循环，最后在 72℃延伸8分钟。取PCR产物5川，加入限制性内切酶 SmaI12U，相应酶解反应缓冲液lOXBufferD211，去离子 水补充至总反应体积2011，于30C孵育5小