疫苗制造基本程序精要.ppt

疫苗制造基本程序 一、病毒性禽胚培养疫苗制造 流程图2——病毒性禽胚疫苗制造工艺流程 示例——甲型H1N1流感疫苗 数据来源：北京科兴生物制品有限公司研制情况报告 二、病毒性细胞培养疫苗制造 流程图3——病毒性细胞疫苗制造工艺流程 三、病毒性动物组织疫苗制造 流程图2——病毒性组织疫苗制造工艺流程 流程图1——细菌疫苗制造工艺流程 示例——皮上划痕人用炭疽活菌苗制造 1　菌种 1.1 菌种来源： 　　为无荚膜，水肿型，具有一定残余毒力，免疫原性较好的A16R菌株。由中国药品生物制品检定所分发或经同意。 1.2菌种保存：应以冻干法或用50%(ml/ml)甘油保存。每3~5年应全面检定其培养特性、残余毒力、安全性及免疫力，建立种子批。生产前只检查菌形，培养特性及噬菌体特异性。 1.3菌种检定 1.3.1 培养及生化特性 　　在牛肉消化液琼脂或其他适宜固体培养基上生长，菌落为灰白色，不透明，呈卷发状。为革兰氏阳性大杆菌，呈链状排列。无运动力。能够形成芽胞。液体培养呈絮状发育，在血清培养基上不形成荚膜。能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不分解水杨苷。 1.3.2 残余毒力试验 　　用体重350～400g健康豚鼠5只，各皮下注射0.5亿/ml的牙包悬液1ml。另用体重18～20g小白鼠5只，各皮下注射0.5亿/ml的芽胞悬液0.1ml。观察10天，3只以上动物应出现水肿，可有特异死亡。但脏器涂片只应找到无荚膜的本菌。若全部动物不出现水肿，应重试。重试仍无水肿，菌种不得用于生产。 1.3.3 安全试验 　　用体重2.0～2.5kg分健康家兔10只，各皮下注射2.5亿/ml的芽胞悬液1ml，观察10天，在注射部位可出现水肿，全部动物应活存。如有死亡，应用同数动物重试，重试仍有死亡，菌种不得用于生产。 1.3.4 免疫力试验 　　上述安全试验动物于注射后18～20天，用炭疽毒菌攻击，各皮下注射20个MLD。同时用同体重的健康家兔3只，各皮下注射1个MLD作为对照。观察10天，对照动物死亡3只。试验组保护60%；对照组死亡2只，试验组保护80%为合格。对照动物死亡1只或无死亡，为对照不成立，应重试。 2　制造 菌种：接种牛肉消化液琼脂或其他适宜固体培养基，于34℃培育18～20小时，经检查为纯菌者，保存于2～8℃，在2周内供作生产种子用。 培养基：用pH7.2～7.4牛肉消化液琼脂或其他培养基。 种子：将供制造用菌种，移种于牛肉消化液中。于34℃培育20～24小时，检查其生长特性、菌形及纯度，应符合要求。 接种：经检查合格之种子培养物，接种于牛肉消化液琼脂上，置33～34℃培育。成熟的典型芽胞达至80%以上、无杂菌者采集。 采集：将培养物刮入50%（ml/ml）甘油蒸馏水原液瓶内，振摇使成均匀悬液。每瓶取样按《生物制品无菌试验规程》进行纯菌试验。 合并：将纯菌试验合格之原液进行合并分批，取样做纯菌试验、浓度测定及活菌计数。 稀释分装　用灭菌的50%甘油蒸馏水将原液稀释成每ml含芽胞40亿个，即为皮上划痕用菌苗。分装按20人份/ml分装。规格为每安瓿1或2ml，抽样进行成品检定。 灭活细菌疫苗通用制造程序 一、细菌性灭活疫苗制造 毒种：毒种的优劣不仅影响疫苗的产量，而且也影响疫苗的质量，毒种不纯会产生相互干扰，减毒活疫苗毒种若毒力回升易造成事故，因此毒种的选择应挑选那些致病性低，免疫效价高而持久，抗原谱广的，易增殖，便于生产，可在传代细胞上传代的毒种。 培养病毒的细胞：细胞若有潜在的致癌性病毒或慢病毒，以及有支原体污染均不能用作疫苗生产。对此因素应严格检查。此外若细胞本身发生转化后，不宜于制备活疫苗，只能制备一些灭活疫苗或亚单位疫苗。 培养液：培养细胞的营养液中多少含有一定量的血清蛋白，在疫苗使用中常会出现某种程度的过敏反应，为此，应尽量使细胞适应于无血清蛋白的培养基中，以消除过敏源。 甲醛灭活剂的使用：甲醛能使病毒灭活，但仍保持其抗原性，因此普遍用来制备灭活病毒疫苗，但要控制含量。 获得质量优良、安全的产品，关键环节如下 谢谢！ 1．组织灭活疫苗 采取收获的组织经无菌检验及毒价测定合格后，按规定比例加入平衡液和灭活剂（甲醛、酚、结晶紫等）制成匀浆，然后按不同病毒的灭活温度、时间进行灭活。如狂犬病疫苗配制按脑组织1:4加入含有甘油及1%酚蒸馏水，于36?0.5?C灭活7天制成；猪瘟结晶紫疫苗配制，按血毒4份，结晶紫甘油溶液1份混合，于37?C~38?C灭活6~8天。 2. 弱毒组织疫苗 在无菌操作下剔除脏器上的脂肪与结缔组织等，称重后剪碎，加入适最保护剂制成匀浆，然后滤过扣除残渣量，再按滤液中的实际组织量计算稀释倍数，加入余量保护剂和青链霉素500~1000U(?g/ml)，充分摇匀后置0~4?C冷暗处处理一