同源重组整合vgb基因提升枯草芽孢杆菌亚麻脱胶能力.pdfVIP

2015年第 37卷第2期 中国麻业科学 PLANTFIBERS·CIENCESINCHINA 87 文章编号：1671-3532 (2015)02-0087-08 同源重组整合vgb基因提升枯草芽 孢杆菌亚麻脱胶能力 张懿翔’，丁若矗 ，陈婷 ，郁崇文 ，张兴群h (1．东华大学生态纺织教育部重点实验室，上海201620； 2．东华大学纺织面料技术教育部重点实验室，上海 201620； 3．东华大学纺织学院．E海 201620) 摘 要： 【目的】将透明颤茵血红蛋白 (VHb)基因 (vgb)在枯草芽孢杆菌中进行整合表 达，以改善枯草芽孢杆茵的呼吸强度，通过高密度培养提高果胶酶的表达量，最终明显改善脱 胶效果。【方法】构建含有vgb基因、amyE基因以及启动子P43的pSK—vsb(+)质粒，通过 同源重组的方法，将vgb基因整合到枯草芽孢杆茵A5的染色体上。得到稳定表达透明颠茵血红 蛋 白的枯草芽孢杆茵A5一vgb(+)。分别采用PCR和CO差光谱分析法检测vgb基因的整合状 态与血红蛋白的稳定表达，并通过发酵摇瓶试验研究VHb对茵株果胶酶产量的影响。将构建好 的A5一vsb (+)茵株进行脱胶试验，通过XRD结晶度与电镜扫描分析鉴定脱胶效果。 【结果】 PCR与CO差光谱检测表明，vgb基因成功整合在A5菌株中，且正确表达的VHb具有生物学活 性，在 150rpm，37℃，pH=8．0，16小时发酵的条件下，vgb基因的表达促使A5一vgb(+)茵 株的果胶酶产量较不合vgb基因的茵株提升了29．5％。XRD与电镜扫描结果表明，构建的A5一 vsb (+)菌株的脱胶效果相较于不合 vgb的菌株，在结晶度上提高了O．55％，表面更光滑。 【结论】将vgb基因整合至枯草芽孢杆菌A5菌株中，可提高A5茵株的脱胶效果。 关键词：生物脱胶；果胶酶；枯草芽孢杆菌；vgb基因；同源重组 中图分类号：Q789 文献标识码 ：A ImprovementofFlaxDegummingbyChromosomal IntegrationofVitreoscillaHemoglobinGene(vgb) inBacillussubtilis ZHANG Yi—xiang ，DINGRuo—yao’ ，CHENTing ， YU Chong—wen · 。ZHANGXing—qun’ (1．I(e)rLaboratoryofScienceTechnologyofEco-Textile，MinistryofEducation，Sll 201620，China； 2．KeyLaboratoryofTextileScience Technology，MinistryofEducation，Shanghai201620，China； 3．CoUegeofTextiles，DonghuaUniversity，Shanghai201620，China) Abstract：ThegeneVitroscillaHemoglobinwasintegratedandexpressedinBacillussubtilistoen- hancetheeffectofdegummingbyimprovingpectinaseproduction．Promoterp43andgeneamyE，pSK一 收稿 日期：2014—09—26 基金项目：中国博士后科学基金面上资助 (2014M561386)；国家麻类产业技术体系建设专项资金资助项 目 (CARS一19)；中 央高校基本科研业务专项资金 (14DI10524)；大学生 “小平科技创新团队”(麻类纤维生物脱胶技术产业化集成研发团队) 作者简介：张蛄翔 (1987一)，男。硕士研究生。研究方向：纺织生物技术。E—mail：512413278@qq．corn。 ·通讯作者：张兴群 (1963一)，男，剐教授 ，研究方向：纺织生物技术 。E—mail：xqz@dh edu．Bn。 88 中国麻业科学