第三章固定化精要.ppt

思考题 固定化酶属于修饰酶吗？固定化与酶的化学修饰在方法上有何异同？ 固定化酶活力、稳定性、专一性等特性发生了哪些改变？为什么？ 固定化酶的实际反应速率不同于固有速率？原因何在？ 针对目前的研究现状，你认为可以从哪些角度来深入固定化酶技术的研究？请说明其理由。 试述固定化生物催化剂的应用。比较游离生物催化剂与固定化生物催化剂的应用。 设计固定化系统时，如何从载体、酶、方法三方面考虑？ 除了固定细胞、酶，还可以固定其他吗？ 固定化酶活力的测定方法有哪些？简要叙述每种方法。 生物催化的类型与 方式 1 类型： 含酶整细胞：生长细胞、休止细胞、冻 干细胞、处理或修饰细胞。 分离纯化酶：细胞萃取液、纯酶制剂、处理或修饰酶、多酶系统。 2 方式：游离状态、固定化 3催化反应相:水溶液、含有机溶剂的水溶液、 水-有机溶剂的双相系统、有机溶液或水微溶有机溶液 青霉素酰化酶催化合成头孢类抗生素 7-ACCA or 7-ADCA as nucleus 酶促合成头孢类抗生素 -- Reversible reaction -- Hydrolysis of substrate or product by biocatalyst -- Difficulty of separation of product from reactants + + Esterase Hydrolase Synthetase 固定化酶在医药治疗上的应用 例2：制造人工肾 利用固定化脲酶透析液和活性炭一起制成的体外循环装置，大大提高了疗效。固定化脲酶由酶与离子交换树脂一起制成微小胶囊尿酶可分解尿素为NH3和CO2，NH3被树脂吸附，CO2可由肺部排出，活性炭用以吸附尿素以外的代谢废物。 3．固定化酶在分析化学中应用 酶柱和酶管，可与分光光度计、荧光计或电量计结合，形成酶电极，进行某些物质的自动分析。 酶电极 酶电极 特点：快速、方便、灵敏、精确 范围：糖类、抗生素、氨基酸、甾体化合物、有机酸、脂粉、醇类、胺类以及尿素、尿酸、硝酸、磷酸等 要求：酶必须有较强的专一性，并且要有一定的纯度。 一．概论 生物传感器又称生物活性物质修饰的传感器。 一般传感器可分为物理传感器和化学传感器。例如热敏电阻是最常用的物理传感器，而玻璃pH电极是最常用的化学传感器。 固定化青霉素酶层 热敏电阻 pH电极敏感部 固定化青霉素酶层 生物传感器的基本原理； 易测量的 物理,化学 量 生物 活性 物质 不易测量的 化学,生物量 基础 传感 器 测量 信号 酶生物传感器 微生物细胞生物传感器 动物组织生物传感器 植物组织生物传感器 免疫生物传感器 基因生物传感器 其他杂合膜生物传感器 电化学生物传感器（又称为生物电极） 光学（纤维）生物传感器 热敏生物传感器 压电晶体生物传感器等等 生物电极还可分为； 基于O2检测的生物电极 基于H2O2检测的生物电极 基于NH3检测的生物电极 基于CO2检测的生物电极 基于pH检测的生物电极 电子转移介体生物电极 直接电位免疫生物电极 酶标免疫电极等等 生物传感器中涉及的生物反应主要有三类； 1.酶反应（包括多酶反应）; 2.免疫反应; 3.杂交 合 反应;杂交反应是指作为基因探针的单链寡核苷酸与目标核苷酸以碱基配对为基础而形成双链核苷酸的反应。 AGCCTAGCTGAA TCGGATCG AGCCTAGCTGAA TCGGATCG 免疫反应示意 杂交 杂合 反应示意 I 空气饱和的pH缓冲液 磁力搅拌子 测量信号 固定化生物活性物质膜 溶解氧电极 恒温循环水 基于溶解氧测量的生物电极工作图 研究新方向-微生物传感器 呼吸活性测定型：利用固定在高分子膜上的微生物细胞的呼吸作用，测定氧气的消耗和二氧化碳的生成，从而确定被测定物质的量 电极活性测定型的微生物传感器是利用固定在膜上的微生物细胞的新陈代谢作用，测定电极活性物质的量的变化。由固定化微生物膜与生物燃料电池、离子选择电极和气体电极等组成 4． 固定化酶和亲和色谱 亲和技术的基础：是生物活性化合物生物特异信息的综合。 利用了生命现象中生物分子间特有的高亲和力、高专一性，可逆结合而设计的纯化方法 是唯一能够体现待分离物质间生物学功能差异的分离方法 5． 固定化酶与环境保护 一：环境监测 二：污染物处理。 6． 新能源开发中的应用 H2是重要的能源物质，虽然有许多微生物可以产生H2，但产氢系统不稳定。有人利用固定化丁酸梭菌连续产氢，稳定性比天然细胞好。 将植物的叶绿体中的铁氧还原蛋白氧化酶系统用胶原膜包被，可用于水的光介产生氢气和氧气 7． 固定化酶在基础理论研究中应用 阐明酶反应机理 揭示酶原激活机理 酶亚基性质的研究 研究蛋白质-核酸分子结构 例：用N,N-亚