HPV的检测及其临床应用概述.pptVIP

HPV的检测及其临床应用 陕 西 省 人 民 医 院 检 验 科 刘 文 康 HPV 乳头瘤病毒科属小DNA病毒 乳头瘤病毒的基因组主要编码三组基因 三个癌基因，包括E5、E6和E7，负责调节癌细胞转化过程； 两个调节基因，包括E1和E2，负责调节转录和病毒基因组的复制； 两个结构蛋白基因，包括L1和L2，组成病毒颗粒 HPV感染 生殖器HPV感染的潜伏期变化极大。一般来说，生殖器疣在HPV感染3-6月后显现，然而也有研究表明潜伏期有数个月甚至几十年； 绝大多数的HPV感染是一过性的，新发感染大多1-2年内会发生自愈； 仅有少数的HPV感染会保持潜伏性，几年或几十年后会再激活。 完整的HPV感染循环 HPV感染颗粒突破下肛殖道表皮 HPV感染颗粒进入表皮细胞的基底层 随着基底层干细胞的子细胞分裂以及在垂直方向上的成熟化，病毒在基底层以上鳞状细胞中复制 成熟的病毒在表面细胞分离时释放到环境中 HPV与宫颈癌的相关性 年轻性活跃的女性HPV感染率最高，感染高峰年龄为18～28岁 多属于一过性感染，通过自身免疫将HPV消灭 只有持续感染HPV的妇女,才成为子宫颈癌高发人群 HPV感染到发展成为子宫颈癌需要9-25年时间 30%发展成为CIN1,10%发展成为CIN2,10%进一步发展成为CIN3，1%发展成为子宫颈癌 宫颈癌前病变 宫颈上皮细胞内瘤变 （CIN）；包括宫颈非典型增生和宫颈原位癌，反映宫颈癌发生、发展的过程。从细胞学分为CINI、Ⅱ、III级，包含宫颈鳞状上皮细胞内病变和腺细胞内病变。 宫颈癌现状 女性第二大常见恶性肿瘤 全世界每年新病例数为56.5万 在发展中国家宫颈癌的发生率为发达国家6倍，有50%的病例发生在中国和印度 中国每年新病例为18.15万 中国每年有3万多的妇女死于宫颈癌 发展中国家的新发病例多是晚期患者 未能早期诊断 细胞学检查未能普及 阴道镜应用条件受到限制 民众对宫颈癌的防范意识欠缺 发病年龄 原位癌的发病年龄为35-39岁 浸润癌为40-49岁 宫颈癌的新动向 近年来由于生活方式的改变 发病率: 有上升趋势 发病年龄: 趋向年轻化 HPV 感染和宫颈癌在不同年龄组的发生率 哪些些妇女更容易患宫颈癌 性生活过早 早孕多产或多次人工流产 自己或性伴侣有多个性伴侣 曾经或正患有生殖道HPV感染 有或曾经患有其它性病 吸烟、吸毒和营养不良 内分泌紊乱或免疫力低下的妇女 现在基本明确宫颈癌的病因就是高危型HPV的持续性感染。 感染HPV病毒到发展成浸润癌需要大约十年的历程，这是重要不可忽视的时间，只要定期进行妇科健康检查，就可以及早发现子宫颈癌癌前病变并加以治疗，就可有效地扼制其癌变;预防子宫颈癌的发生。 引起宫颈癌几个方面因素 HPV E6癌蛋白与宫颈恶性病变的关系 HPV E7癌蛋白的分子生物学特性 宫颈上皮细胞发生异常和瘤变的进化过程 HPV致宫颈癌进展示意图 关于HPV感染 HPV感染多数不发展成为宫颈癌，可以在9-16(8-10)个月消失; 间隔半年2次HPV（＋）; HPV持续感染; 28%的持续感染者,在2年内发展为CIN I；70% 的持续感染者4年内发展为CINII; HPV实验室检测 　临床常用的HPV检测方法 病理学检查 细胞学检查 免疫组化检测 原位杂交技术检测 聚合酶链反应( PCR)技术　 DNA芯片分型检测 杂交捕获DNA分析 病理学检查 鳞状上皮疣状乳头状增生 表皮角化不全 棘层不规则增厚 基底层增生 上皮脚延长 中表层出现灶状分布的挖空细胞等。 　细胞学检查 凹空细胞、角化不良及湿疣外底层细胞 细胞学诊断HPV感染敏感性较差 　 免疫组化检测 检测HPV的衣壳抗原来进一步明确HPV感染 所得阳性反应定位明确,判断可靠 必须在HPV-DNA 复制成熟后才有衣壳装备 敏感性较低 原位分子杂交 用来测定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，检测重组体DNA） 通过非放射性探针对石蜡组织进行检测,能作定位检测,假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。 　聚合酶链反应( PCR)技术 设计与HPV-DNA互补的一对特异性核苷酸引物,以HPV-DNA为模板以指数增长的速率进行体外扩增 敏感性最高,可对HPV进行分型,测定病毒载量,发现新基因型,对基因进行序列分析 缺点为样品间易交叉污染导致假阳性 　杂交捕获DNA分析 标本中的HPV-DNA 与液相中的RNA探针结合,形成特异性的RNA-DNA杂交体,被微孔板内的特异抗体所捕获,然后被所加的发光底物检测,其发光的强度与标本中的DNA 量成比例,因而可对HPV进行半定量检测 效率高,适于大量人群检测,临床上操作简便 DNA裂解 → RNA-DN