牛成纤维细胞系的建立、体外受精及核移植的分析研究.pdfVIP

摘要 摘 要 本实验重点是在新建胚胎实验室建立牛成纤维细胞培养技术体系和核移植技术体系，完 善和熟化体外受精技术体系。并为优秀公牛遗传资源的保存，试管牛和廉价胚胎生产以及转 基因牛的研究打下基础。研究结果表明： 1．采用组织块贴壁法建立了优秀奶牛种公牛耳组织成纤维细胞系。细胞冻存代数在3-4 代，冻存密度达到l×106个／ml以上：复苏后细胞存活率不存在差异，均保持在90％以上：成 纤维细胞生长曲线呈“S”型；细胞系微生物检测结果均为阴性，未受到细菌和支原体污染。 2．完善与熟化了牛体外受精技术体系。采集卵母细胞547枚，进行受精胚胎和孤雌胚胎 的发育及发育速度的比较。体外受精卵的卵裂率(69．8％)、8细胞率(47．3％)和囊胚率(26．1％) 低于对照组孤雌胚胎的卵裂率(73．O％)、8细胞率(49．2％)和囊胚率(32．6％)。二者的胚胎发育都 在第6d开始有囊胚出现，集中在第6d、7d和8d。而且实验发现，卵丘．卵母细胞复合体中 的卵丘细胞能将体外受精胚胎囊胚发育率由10．2％提高到27．5％，在培养液中添加Vero细胞， 能将体外受精胚胎囊胚发育率由12．4％提高到27．5％，卵丘巧日母细胞复合体中的卵丘细胞及 以Vero细胞作为饲养层细胞能明显提高体外受精胚胎囊胚发育率。 3．建立了牛体细胞核移植技术体系。牛体细胞核移植的卵裂率(72．4％)、8细胞率(38．8％) 和囊胚发育率(1 1．2％)低于对照组卵母细胞孤雌激活的卵裂率(78．8％)、8细胞率(55．3％)囊胚 发育率(34．9％)。两组的卵裂率无显著差异，但8细胞率和囊胚发育率的差异显著。在培养液 中添加Vero细胞，能将克隆胚胎囊胚发育率由0％提高到11．2％，明显提高胚胎囊胚发育率， 能够为实验室提供可移植的胚胎。 关键词：牛；成纤维细胞：卵丘细胞：体外受精；体细胞核移植；胚胎发育 V Abstract TheResearchontheEstablishmentofBovine FibroblastCellLineandinVitrO andNuclearTransferofBovine Abstract culture eell transfer Inthis fibroblasteell nuclear research,bovine technology system，somatic andbovineinvitrofertilization areestablishedinall technologysystem technologysystem research thefoundationfor of newly—builtembryologylaboratory．Thisprovided preservation resourceof ofbovine test-tube and of superiority genetic bull，productioncheap embryostudy bovine．The shown： transgenic results嬲following adherentcellculture fibroblastcelllineswereestablished．Itisbest 1．Adopting method，bull