五酯片对细胞色素P450+3A和P-糖蛋白活性影响研析.pdf

摘要 五酯片对细胞色素P4503A和P．糖蛋白活性 影响的研究 硕士研究生：薛新平 专 业：药理学 方 向：药物代谢与药物基因组学 导 师：黄民教 授 中山大学临床药理研究所 中山大学药学院药物代谢与药动学实验室 中文摘要 五酯片为五味子的乙醇提取制剂，具有抗肝细胞损伤作用，临床上用作 保肝护肝药物使用。环孢素A和他克莫司，均为细胞色素P4503A和P．糖蛋白 的底物，是临床上常用的免疫抑制剂，广泛用于预防器官移植术后排斥反应的发 生。临床上，五酯片常用作器官移植病人的保肝护肝药物与环孢素A和他克莫 司联合使用，以防治免疫抑制剂所致的药源性肝损害。本实验室前期研究结果表 明，在肾移植病人中，五酯片合用他克莫司后，五酯片可以显著提高CYP3A和 P—gp的底物他克莫司的血药浓度。那么，五酯片是否能对同样是CYP3A和P-gp 底物的环孢素A产生相同的作用呢?能否获得五酯片影响CYP3A与P．gP活性 的直接证据呢? 因此，本课题拟在整体动物水平探讨五酯片对不同剂量环孢素A药代动力 学的影响，考察五酯片通过影响CYP3A与P—gP的活性而影响环孢素A的血药 浓度的程度。另外，本课题通过使用经典的CYP3A与P．印阳性探针药，评价五 摘要 活性的直接证据，为临床上五酯片与CYP3A与P．gp底物药物的合理用药提供科 学数据。 一、建立和确证生物样品中环孢素A检测的LC．MS／MS方法 目的：建立并确证生物样品中环孢素A的LC．MS／MS检测方法。 方法：采用液相色谱．串联质谱方法检测全血中环孢素A的血药浓度。生物样品采 用硫酸锌溶液及乙腈两步沉淀蛋白后进行乙酸乙酯液．液萃取法抽提。离子源为 电喷雾离子化源(ESI)；检测方式为正离子检测；扫描方式采用选择反应监测 xTerra (SRM)。色谱分析柱为CIsMS分析柱(3．5雌2．1x50ranl．Waters，USA)； 流动相为甲醇．水(含10mM醋酸铵)(80：20，v／v)；流速为200 I-tL／min；柱温 min。 为60℃：分析时间为3 结果：用于定量分析环孢素A的离子反应分别为m／z ng／mL，方法定量下限为20ng／mL，生物样品中环孢素A的线性相关程度良好(，2 均大于0．99)。以质控样品计算该分析方法的批内精密度RSD在3．1％～6．3％范围 1．3％范围内；生物样品的提取回收率在47．8％～ 内，批间精密度RSD在6．0％～l 53．O％范围内。各项稳定性考察结果表明环孢素A在所设定实验条件下稳定。 结论：该分析方法经方法学确证结果满意，样品处理及检测过程快速、可靠，可 满足环孢素A临床前药代动力学研究的要求。 二、五酯片对大鼠体内环孢素A药动学的影响 目的：在整体动物水平探讨五酯片对不同剂量环孢素A药代动力学的影响，考察 并比较五酯片对环孢素A和他克莫司血药浓度影响程度的异同。 方法：雄性SD大鼠随机分组后，分别灌胃给予蒸馏水、五酯片混悬液(O．25 g／kg) 或地尔硫卓混悬液(8．1 mg／kg，对照组)，再灌胃给予环孢素A(37．8、1．89 mg／kg)。采用LC．MS／MS法测定环孢素A的血浆浓度，用非房室模型法计算各 主要药代动力学参数，并进行统计分析。 结果：单次灌胃给予五酯片使口服环孢素A(37．8 mg／kg)的AUCo．4sh增加40．1％， Cmx增加13．1％，CL／