构建大容量噬菌体抗体库.pdfVIP

口罩 日刊K 中文摘要………………………………………………………………………………………I 英文摘要……………………………………………………………………………………．III l：；I言………………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1基因工程抗体药物的概述……………………………………………………………．．1 1．1．1基因工程抗体药物的发展背景……………………………………………………l 1．1．2基因工程抗体研究的两个重要技术………………………………………………1 1．2噬菌体展示技术…………………………………………。……………………………．．2 1．2．1噬菌体抗体库基本原理……………………………………………………………2 1．2．2噬菌体展示系统……………………………………………………………………3 1．3噬菌体抗体库技术……………………………………………………………………．．4 1．3．1噬菌体抗体库基本原理……………………………………………………………4 1．3．2噬菌体抗体库的构建及筛选．兰…………………………………………………一5 1．4噬菌体抗体库的应用现状……………………………………………………………．．7 ．1．．4．1医学微生物学领域的应用…………………………………………………………7 l，4．2自身免疫性疾病研究方面的应用…………………………………………………7 f■：3肿瘤研究方面的应用……………………………………登：………………………8 1．4．4诊断和治疗方面的应用……………………………………………………………9 1．5展望…………………………………………………………………………………………………………………9 ，1．6研究的目的和意义………………………………………．1…………………………．10 2材料与方法…………………………………………………………………………………ll 1 2．1实验材料…………………-…………………………………………………………．．1 2．1．1菌种及毒株………………………………………………………………………．1l l 2．1．2质粒…………………………………………………………………………………………………………．1 l 2．1．3工具酶……………………………：．．-……………………………………………．1 2．1．4相关试剂及试剂盒…………………………曼…………………………………．．1l 2．1．5常用溶液配制……………………………………………………………………．12 2．1．6主要仪器…………………………………一?……………………………………．12 2 2．1．7引物…………………………………………………………………………………………………………1 2．2实验方法………………………………………………………………………………15 2．2．1验证PUC19．SacB的自杀功能…………………………………………………．15 ， 9 2．2．3构建噬粒载体PDF．SacB．GX(PSGx)………………………………………．．1 2．2．4构建PDF．D．SacB：…………………………………………………………………………………．20 2．2．5淋巴细胞的分离及总RNA的提取………………………………………………21 2．2．6反转录cDNA的合成…………………．．．．………………………………………22 2．2．7 PCR扩增Fa