基因和基因组1概述.pptVIP

SV40载体基因组只有5243bp，序列已确定，基因组为共价闭合环DNA(cccDNA)，酶切图谱及各种功能的基因定位均已详细了解。病毒DNA较易制备，但是，用SV40重组病毒转染细胞时，随着病毒的繁殖，细胞会裂解，这对基因工程中的应用是很不理想的。SV40 DNA分子小，插入的DNA不能大于2500bp。SV40 DNA的早期功能区插入外源DNA，存在致癌的隐患，为此，人们对病毒载体进行了改造，同时插入tk, dhfr, neo, cat等标记基因，构成了适用于不同目的的表达载体。pSV 载体就是以SV40为基础构建的一群载体的总称。 蛋白质 合成时间 功能 T抗原 早期 启动DNA复制 t抗原 早期 未知 VP1 晚期 主要的病毒外壳蛋白 VP2 晚期 次要的病毒外壳蛋白 VP3 晚期 次要的病毒外壳蛋白 3.3.2.6 腺病毒基因组 腺病毒(adenovirus, Ad) 是一种无外壳的双链DNA病毒，基因组长约36kb，衣壳（capsid）呈规则的20面体结构，直径约80-110nm。 以病毒DNA开始复制为分界线，按转录时间的先后，将腺病毒基因大致区分为早期（E1~4）和晚期转录单位（L1~5）。各种腺病毒基因又可以进一步地分为更小的转录单位，如E1区可以进一步分为E1A和E1B，每个转录单位都至少有一个独特的启动子。病毒的两条链均有编码功能。 腺病毒易于培养纯化，其基因组为线性双链DNA，可插入较大的外源DNA片段，最大的可达约7kb，且可在宿主细胞内大量扩增，宿主细胞范围广泛，可用于基因工程和基因治疗。不足之处是Ad在细胞内复制时可大量释出壳体蛋白质，容易引起宿主细胞介导的免疫反应，使转导的细胞遭到免疫攻击而被破坏。 逆转录病毒属于正链RNA病毒，其主要的结构基因有种群特异性抗原(group specific antigen, gag)，聚合酶(polymerase, pol)和被膜蛋白质(envelope, env)，两端有长末端重复序列(long terminal repeat, LTR)，5-端有帽子结构，3-端有polyA。 3.3.2.7 逆转录病毒基因组 人类免疫缺陷病毒(HIV)颗粒是至今发现的最复杂的逆转录病毒。HIV的基本形态与其它逆转录病毒相似，有核心部分，衣壳和包膜等3种主要结构。核心部分含两个单股正链RNA基因组，两个单体在5-端由氢键相连。每个RNA基因组长9.2kb，基因排列顺序为5-LTR-gag-pol-env-3-LTR，除上述3个结构基因外，还有tat, rev, nef, vif, vpr和vpu 6个调节基因，编码6种调控蛋白质，这在逆转录病毒中较少见。HIV的基因编码区域有许多重叠，除基因tat和rev两侧含有内含子外，大多数基因无内含子，最大限度地利用了有限的RNA序列(图3-11)。 HIV的结构及其与宿主细胞的附着 3.3.3 原核生物的基因组 原核生物的细胞内没有明显的细胞核形态，其遗传物质均为DNA，与蛋白质结合形成类核(nucleoid)，基因组大小在106bp以上。在双链DNA的两条链上都有基因的编码序列。除类核构成的主基因组外，原核生物还有许多独立的DNA小分子，称作质粒。 3.3.3原核生物基因组 Prokaryotic genome 以细菌为代表讲述，有称bacteria genome。细菌对医学分子生物学有重要贡献，是基因工程研究的主要材料之一。因为： 1.构造相对简单，基因结构也不复杂，取材便利，易于培养，可选择突变株进行研究，实验结果容易重复。 2.与人类有共同的分子生物学规律，如： （1）遗传物质都是DNA； （2）主要的功能分子都是蛋白质； （3）基因密码是通用的，等等。 3.尤其是E.coli,是分子克隆是“明星“,基因工程主要原因的工程菌，因为基因工程的主要工作是克隆克核基因在原核系统中表达。 3.3.3.1、原核生物基因组结构与功能的特点 1.基因组通常仅由一条环状双链DNA分子组成。 其DNA是与蛋白质结合，但并不形成染色体结构，只是习惯上将之称为染色体。细菌染色体DNA在胞内形成一个致密区域，即类核（nucleoid），类核无核膜将之与胞浆分开。 2.基因组中只有1个复制起点。 3.具有操纵子结构。 操纵子（operon） 是指数个功能相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动和操纵区）及其下游的转录终止信号构成的基因表达单位。（见第六章） 4. 结构基因无重叠现象，基因组中任何一段DNA不会用于编码2种蛋白质。 5.基因序列