大鼠不同实验组龈卟啉单胞菌rgpB和kgp基因变化的研究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………．．1 英文论著摘要……………………………………………………………………．4 二、英文缩略语………………………………………………………………………。7 三、论文 ． —1￡·—J—‘ 翮舌…………………………………………………………………………………………………………·8 材料与方法………………………………………………………………………。9 实验结果…………………………………………………………………………12 讨论………………………………………………………………………………………………………。15 结论………………………………………………………………………………………………………．．17 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………18 五、参考文献…………………………………………………………………………l9 六、附录 综述………………………………………………………………………………………………………．．2l 致谢………………………………………………………………………………………………………．．31 个人简介…………………………………………………………………………32 ·中文论著摘要· 大鼠不同实验组牙龈卟啉单胞菌 rgpB和kgp基因变化的研究 目 的 通过建立大鼠牙周炎模型检测不同时段的大鼠上颌第一磨牙龈下人工定植的 牙龈卟啉单胞菌浓度变化及牙龈素基因rgpB和kgp的改变探讨在牙周炎发展的不 同阶段牙龈卟啉单胞菌致病基因的变化，为牙周病致病机制的研究提供有益的参 考 材料与方法 1、研究对象的选择 实验组选择6周的成年雄鼠13只，平均体重200克。将接种细菌后4周和8 周分为实验两组，在4周和8周时再取口腔龈下菌斑共获样本20例，空白对照组 样本选择健康，年龄，性别与实验组均有可比性者3例。选择牙龈卟啉单胞菌 (尸gingivalis，Pg)高毒力株(模式株W83)作为接种定植细菌阳性对照。 2、大鼠牙周炎模型的建立 每只大鼠选择2个受试部位，即两侧上颌第一磨牙。麻醉后将大鼠两个第一磨 牙牙龈剥离1毫米左右，用0．2mm钢丝结扎一周，细菌接种，2天接种一次，连 续接种5次，接种的细菌浓度为1．109CFU／ml。在细菌接种两周后取大鼠龈下菌斑， BHI培养基培养一周后分离鉴定证明有P gingivalis存在，从而确定定植细菌成 功。 3、提取DNA 将分别在实验组，空白对照组获得的大鼠龈下菌斑采用细菌基因组DNA快速提 取试剂盒提取DNA。 4、PCR扩增 选择引物针对细菌全基因组DNA，只gingivalis16SrDNA特异性基因，rgpB 胶电泳检测，测灰度值。 5、统计学分析 应用SPSSl3．0统计软件包进行两个独立样本t检验，尺O．05有显著性差异。 实验结果 1、健康对照组Pg相对灰度值平均为I．85，占总细菌总量的百分比浓度平 均为1．45％，实验4周组Pg相对灰度值平均为143．13，占总细菌总量的百分比 浓度平均为66．30％，实验8周组Pg相对灰度值平均为206．41，占总细菌总量 1．2 的百分比浓度平均为8 0％，各组两两比较均存在显著性差异。 DNA总量的百分比浓度 2、健康对照组kgp相对灰度值平均为O．41，占Pg DNA总量 平均为22．16％。实验4周组kgp相对灰度值平均为119．28，占Pg 的百分比浓度平均为83．34