重组人肿瘤坏死子α联合紫杉醇诱导涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的实验研究.pdfVIP

中文摘要 重组人肿瘤坏死因子d联合紫杉醇诱导涎腺腺样囊 性癌细胞凋亡的实验研究 摘 要 adenoidcarcinoma， 目的：涎腺腺样囊性癌(salivary cystic SACC)是发病率较高的涎腺恶性肿瘤，、其恶性程度高，且 易复发、转移。该肿瘤对放疗、化疗不敏感。在以往的实验 中，我们在体外、体内均已证实重组人肿瘤坏死因子0 humantumornecrosisfactor (recombined o．rhTNF—a)可 诱导SACC．83细胞发生凋亡，并检测了相关基冈的表达。 紫杉醇(paclitaxel)是从紫杉(红豆杉)的树皮中提取的一 种化合物，是近年来研究开发出的一类化学结构新颖、作用 机理独特的新型抗肿瘤药。为了克服化疗药物与细胞因子在 抗肿瘤作用中各自的不足，在本实验研究中，我们通过体外 实验．探讨rhTNF一Ⅱ联合紫杉醇对腺样囊性癌细胞的抑制增 殖作用、作用机制以及与细胞凋亡的关系，以期为化疗与生 物治疗联合应用治疗腺样囊性癌提供实验依据。 方法： l材料 1．1实验材料：人涎腺腺样囊性癌细胞系(SACC一83)、新生 鼠肺成纤维细胞(L929)。 1．2药品：重组人肿瘤坏死因子Ⅱ(rhTNF．d)、紫杉醇 (paclitaxel)。 1_3实验动物：新生Balb／c乳鼠。 2方法： 中文摘要 2．1细胞培养：取人涎腺腺样囊性癌细胞(SACC．83)按常 规贴壁细胞法于RPMll640培养液中：含胎牛血清及双抗) 在5％C0237℃的细胞培养箱内培养，取对数生长期的细胞 进行实验。同时原代培养鼠肺成纤维细胞(L929)作为对照。 2．2实验分组：根据不同药物浓度分为9组，药物作用72h。 ①对照组：加入不含药物的培养液；②T组：rhTNF—a终浓 度为150U／ml；③T’组：rhTNF．a终浓度为：1500U／ml； u ⑤P7组：紫杉 ④P组：紫杉醇的终浓度为o．0365 g／ml； u 醇的终浓度为0．365 g／ml；⑥T+P组：含有终浓度州rNF一 Ⅱ150U／ml和紫杉醇O．0365u 7组：含有终浓 g／ml；⑦T+P p 度rhTNF—Q150U／ml和紫杉醇0．365 g／ml；⑧T’+P组： 1500U／ml和紫杉醇O．0365⑨ 含有终浓度rhTNF．3 u∥ml； T7+P’组：含有终浓度rhTNF．o1500U／ml和紫杉醇o．365 ug／ml 2．3检测：OMrT法测细胞增殖抑制率。②流式细胞术检测 细胞调亡率及细胞周期改变，③光镜下观察凋亡细胞形态。 ④在电镜下观察凋亡细胞形态学改变。 结果： 1形态学观察： 1．1 SACC．83细胞单层生长，胞体较大，呈上皮样多角形镶 嵌状排列，可见较多核分裂像。加入TNF—a72h后，SAcc一83 细胞形态发生变化，细胞大多呈梭形或细长形，类似于成纤 维细胞，形态相对规则，核浆比例减小。细胞堆集生长现象 减少，大多散在生长，呈放射状、漩涡状分布，多边形镶嵌 样生长状态逐渐消失。 1．2L929细胞贴壁生长，呈漩涡状分布。细胞体呈梭形，胞 中文摘要 质向外伸出2~3个长短不同的突起。 2MTT法： 2。lSACC．83细胞：细胞增殖抑制率T组为23．54％