克柔念珠菌对口上皮细胞的黏附作用及表达白细胞介素-8的影响.pdf

克柔念珠菌对口腔上皮细胞的黏附作用及表达 白细胞介素．8的影响 硕士研究生：李汝 指导教师：张虹教授 指导小组：杨国玲董岩教授 专业名称：口腔临床医学 摘 要 背景：口腔念珠菌病是由念珠菌属感染所引起的口腔黏膜疾病。近年来，随 着广谱抗生素、细胞毒性药物及免疫抑制剂的广泛应用，艾滋病、糖尿病、恶性 肿瘤患者的增多，器官移植术及导管介入等各种治疗手段的开展，宿主的免疫功 能低下或发生菌群失调，使得口腔念珠菌病的发病率迅速上升。尽管白色念珠菌 是主要的条件致病性真菌，但毒力较弱的菌种如克柔念珠菌的感染也在免疫力低下 的患者中频频发生。口腔念珠菌病的发病机制受到很多因素影响，不仅与念珠菌 菌体本身的形态，菌体表面结构及黏附力有关，还与宿主的免疫防御机制有关。 白色念珠菌黏附于宿主上皮是其在宿主中形成集落及入侵体内的第一步，也是念 珠菌具有强致病性的标志。白细胞介素．80L．8)是中性粒细胞强有力的趋化因子， 在免疫调节和炎症过程中发挥双重作用。大量国内外研究表明在口腔念珠菌病中， 白色念珠菌可以激发口腔黏膜上皮细胞产生IL．8等细胞因子，参与黏膜局部防御反 应。然而有关克柔念珠菌对口腔黏膜上皮细胞黏附作用的研究并不多见，克柔念 珠菌单独及与白色念珠菌混合感染后口腔黏膜上皮细胞表达IL-8参与13腔黏膜防 御反应的研究国内还未见报道。 ．目的：本实验通过克柔念珠菌与口腔黏膜上皮细胞的共同培养，探讨克柔念 珠菌对121腔黏膜上皮细胞的黏附作用。应用逆转录．聚合酶链反应(RT．PeR)和酶联 免疫反应(ELISA)从mRNA和蛋白水平上观察克柔念珠菌单独及与白色念珠菌混 膜上皮细胞防御克柔念珠菌感染中的可能作用。 ·：方法：1．在体外将克柔念珠菌与KB细胞共同培养，以白色念珠菌与KB细 胞的黏附作为对照组，黏附后的细胞爬片经革兰染色，倒置显微镜下计数100个 上皮细胞上黏附的念珠菌数。胰酶消化后收集细胞及念珠菌，台盼蓝排斥实验检 测念珠菌的总数及菌丝转换率。2．将克柔念珠菌的孢子相和菌丝相菌悬液及与白 色念珠菌混合后的孢子相和菌丝相菌悬液分别与KB细胞共同培养，以单独培养 的KB细胞作为对照组，于6、12、24、48小时提取培养上清液，酶联免疫反应 差异进行t检验，判断其统计学意义。 结果：1．克柔念珠菌黏附于KB细胞有时间依赖性，在24小时内随着时间的 延长，黏附数逐渐增多，与对照组白色念珠菌比较，克柔念珠菌的黏附数低于白 色念珠菌；克柔念珠菌黏附KB细胞后，其形态从孢子相向菌丝相的转变也有时 间依赖性，在24小时内随时间的延长，菌丝转换率逐渐增高，但克柔念珠菌的总 数却减少。2．KB细胞基础表达少量的IL．8蛋白，在克柔念珠菌单独及与白色念 珠菌混合感染KB细胞后表达IL．8的蛋白水平均高于对照组；克柔念珠菌菌丝相 单独及与白色念珠菌菌丝相混合感染KB细胞后表达IL．8的蛋白水平高于孢子 相；培养上清液中IL．8的表达随时间的延长而逐渐增加，24小时达到高峰，随 后出现下降趋势；克柔念珠菌感染KB细胞后表达IL．8的蛋白水平，无论是孢子 相还是菌丝相，均高于克柔念珠菌和白色念珠菌的混合感染。3．克柔念珠菌单独 及与白色念珠菌混合感染KB细胞24小时后，表达IL．8mRNA的水平均高于对 照组；克柔念珠菌菌丝相单独及与白色念珠菌菌丝相混合感染KB细胞后表达 IL．8mRNA的水平高于孢子相；克柔念珠菌的孢子相及菌丝相感染KB细胞后表 达IL．8mRNA的水平均高于克柔念珠菌与白色念珠菌混合的孢子相及菌丝相。 结论：1．克柔念珠菌对口腔上皮细胞的黏附作用有时间依赖性，克柔念珠菌对 宿主细胞的黏附能力弱于白色念珠菌。2．克柔念珠菌形态从孢子向菌丝的转换可以 帮助念珠菌逃避宿主的防御反应，与致病性有一定的关系。3．克柔念珠菌在mRNA 和蛋白水平上能增强I：3腔上皮细胞表达IL．8，提示IL．8可能与局部克柔念珠菌感染 的防御反应相关。4．克柔念珠菌与白色念珠菌混合感染时表达IL．8的含量低于克柔 念珠菌单独感染，提示克柔念珠菌与白色念珠菌之间可能存在相互拮抗作用。 关键词：克柔念珠菌 口腔上皮细胞 白细胞介素．8黏附作用 2 Adhesi