tgf-βl;,2gt;在sd鼠颅缝形成过程中的表达.pdfVIP

中文摘要 刖 再 颅缝早闭畸形发病率为1／2500。病因和发病机制至今仍不明 确。本实验应用HE染色及SABC法免疫组化染色技术，研究不同 fac— 骨缝，不同时间位点转化生长因子一82(transforminggrowth tor一8。，TGF一8：)的表达，观察骨缝的融合情况，为进一步探讨骨缝 融合机制及颅缝早闭畸形病因提供理论依据。 ～、嚼才料与方法 、、 时间位点上，取后额缝(PF缝)与矢状缝(SAG缝)制成石蜡标本， HE染色及TGF一口。免疫组化染色，观察骨缝形态学变化及不同时 间位点免疫组化染色强度变化。 实验结果 1．PF缝与SAG缝的HE染色结果 本实验以HE染色显示骨缝组织形态学变化，观察到骨缝形 态学上有三种基本发育阶段：(1)开放阶段：在任何时间位点上矢 上的SD鼠PF缝，此时骨缝已基本融合，纤维性骨缝被骨组织所 替代。 ·】· 2．TGF一口：在PF缝与SAG缝中的表达 实验结果表明在不同的发育阶段，不同的部位TGF一8。免疫 TGF一＆在骨前沿染色较高，骨缝中心区染色较弱。N5组中PF缝 染色较强，为4+；而SAG缝染色稍弱，为3+。此时骨缝硬脑膜侧 基质前体细胞开始发育成成骨细胞，这些细胞继续发育成有活性 保持开放，然而两者之间有明显差异。此时PF缝染色强度为4+， 而SAG缝为3+。PF缝内较大的成骨细胞前体开始在硬脑膜侧 形成，细胞外基质和活跃成骨细胞对TGF—B。染色均较强。N15 组，PF缝处于融合活跃期，颅内侧有新骨形成，染色水平很强，为 4+。而与此形成强烈对照的是开放的SAG缝染色强度急剧下 降，为1-6。N20组，PF缝颅内侧已经融合，颅外侧细胞成分明显 减少，大部分为无序状的纤维组织充满，TGF一8。染色水平急剧下 降，为1+。而SAG缝仍保持开放，TGF一8。染色水平也非常低。 N25组和N30组PF缝基本完全融合，颅外侧偶尔可见结缔组织 残余。TGF一8。免疫反应性仅在残余结缔组织内可以见到。但与前 几个时间位点相比，染色水平很低。SAG缝仍保持开放，TGF一 染色水平始终很低。与前几个时间位点相比，在成熟SAG缝内活 跃成骨细胞明显减少，结缔组织更加无序。 讨 论 1． 研究SD鼠颅缝融合的意义 放，到15天左右PF缝开始融合，融合方向为从颅内向颅外。而 SAG缝不发生融合，这与人类颅缝融合类似。通过研究SD鼠颅 缝融合过程，可以探讨人类颅缝正常发育及颅缝早闭畸形发生机 ·2· 制。实验显示SD鼠PF缝和SAG缝有着截然不同的发育结局，推 测生长因子可能是导致这种结果的重要原因之一。 2．TGF一8：和颅缝融合 TGF一8诱导骨和软骨生成的作用使我们推测它在颅缝融合 过程中可能起重要作用。Jovce等人研究发现在同等剂量条件下， 示TGF—p：在颅缝融合过程中的作用要远远大于TGF一口。。本研究 作用。有学者认为骨缝区的TGF一可能是硬脑膜通过旁分泌产 生，作用于骨缝区成骨细胞，或是成骨细胞通过自分泌产生，通过 多肽，如骨钙素，引起骨形成。目前，通过RT—PCR已从胎龄19天 表达至少部分是由于硬脑膜旁分泌的结果。然而究竟TGF一日：在 SD鼠PF缝融合过程中是个始动因素还是一个继发现象，还需要 做进一步的研究。 3．TGF—p。和颅缝早闭 实验结果提示TGF一8：对颅缝融合起促进作用。因此我们推 测生长因子如TGF—B：的过度表达可能是颅缝早闭的病因之一。 近来一些研究发现人类早闭骨缝与正常开放骨缝相比，特别是在 骨缝边缘区域，TGF一表达增强，支持我们这一假设。外源性 等人首次报导了体内局部直接应用外源性重组TGF—p。始动颅缝 融合。结果显示PF缝TGF一岛注射区颅外侧有加厚的骨皮质形 成，且颅外侧有融台迹象发生。另外StelnickiEJ等