生物化学蛋白质组学分析.ppt

主要内容 一、蛋白质组学的涵义 二、蛋白质组研究的技术简介 三、蛋白质组学的应用前景 蛋白质组学的涵义 1、蛋白质组的定义 2、蛋白质组学的涵义 中心法则及其补充 蛋白质组的定义 1995年wasinger VC将蛋白质定义为：一个基因组编码的全部蛋白质 1997年在蛋白质研究的第一部专著中，定义为：一个基因组或组织所表达的全部蛋白质 1999年《Nature》定义为：在一个细胞的整个生命过程中由基因组表达的一级表达后修饰的全部蛋白质 它旨在阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式,其内容包括蛋白质的定性鉴定、定量检测、细胞内定位、相互作用研究等,最终揭示蛋白质功能,是基因组DNA序列与基因功能之间的桥梁, 是在蛋白质水平上定量、动态、整体性地研究生物体。 因此，蛋白质组学的研究必然是后基因组的重要内容 蛋白质组与基因组的关系 基因组 基因组是确定的，组成某个体的所有细胞共同享有固定的基因组。 蛋白质组 蛋白质组是一个空间和时间上动态变化着的整体。各个基因的表达调控及表达程度会根据时间，空间和环境条件发生显著的变化，所以，不同器官，组织或细胞内拥有不同的蛋白质组。 蛋白质组研究的技术简介 双向电泳 图像数字化分析 质谱分析 蛋白质组数据库的简历 完整蛋白质组研究应包括下列步骤 双向电泳 双向凝胶电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术，具有简便、快速、高分辨率等优点。 1975年，意大利生化学家O’Farrell发明了双向电泳技术，大大提高了蛋白质分离的分辨率而得以广泛应用，至今经历了30多年的发展，双向电泳技术已较为成熟。 双向电泳的原理 第一向电泳（等电聚焦电泳 ）：蛋白质因等电点不同而被分离； 第二向电泳（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 ) ：蛋白质因分子量的不同被分离开。 蛋白质检测 检测某种蛋白质是否存在是，常用Western印记，显示蛋白质全谱是多用银染检测 目前蛋白质组研究常是两种染色体相结合：经银染分析寻找有意义的点后，再加上大量试样，用考马斯亮蓝染色，再做进一步质谱鉴定。 图像数字化分析 经双向电泳分离、染色体所得图像需经过图像扫描、计算机数字化处理，来确定每个蛋白质点的等电点和相对分子质量，对蛋白质作出初步鉴定 蛋白质数据库的建立 经双向电泳、质谱分析等得到的一系列图谱和数据等大量信息后，最后必须建立蛋白质组数据库 目前应用最多的数据库包括：蛋白序列数据库、蛋白模式数据库、蛋白双向电泳图谱数据库、质谱数据库、蛋白三维结构数据库、蛋白质翻译后修饰蛋白库、基因序列数据库、基因组数据库、代谢数据库。 * * * * 一个已知的基因序列也很难预测其编码的蛋白质的功能。 同时，蛋白质翻译的修饰、结构形式、蛋白质分子的相互作用及蛋白质分子与其他分子的相互作用等问题，都是基因组学所不能回答的。因此，科学家们就把研究的重心由基因转向了其编码合成的全部蛋白质。 样品制备 第一相 等点 聚焦 第二相 SDS-P AGE 蛋白质 检测 图谱数 字化分析 质谱分子 建立 数据库 * *