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昆虫 学 报
小菜蛾中肠氨肽酶基因 的克隆
原核表达及蛋白质同源建模分析
许 炼 高焕娟 潘志针 朱育菁 陈清西 刘 波
福建省农业科学院农业生物资源研究所 福州 厦门大学生命科学学院 福建厦门
摘要 目的克隆和表达小菜蛾 氨肽酶基因并进行基因序列分析和同源建模分析 方法 以
小菜蛾中肠为模板克隆分析氨肽酶基因序列 原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定 应用配体印迹分析
氨肽酶与 蛋白的结合 通过蛋白质建模对突变位点进行分析 结果从小菜蛾中肠扩增出氨肽酶
基因 该基因全长 编码 个氨基酸 预测蛋白分子量为 等电点为 进化树分析显
示 克隆得到的氨肽酶基因属于家族 将其命名为 登录号 蛋白具
有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征 即含有糖基化位点糖基化位点和锚定位点 具有锌
蛋白酶结构域和端跨膜区域 在大肠杆菌 中原核表达 表达产物经电泳 在
附近出现特异性条带 酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性 比活力为 配体印
迹结果显示表达的 能与 蛋白特异性结合 多序列比对结果表明 与其他已报道的小菜蛾氨肽酶
相比 氨基酸序列有 个保守性位点发生了突变并通过蛋白质建模的方式表征突变位点 结论本研
究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶 并发现其能与 蛋白特异性结合 通过蛋白质建模
对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测 这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础
关键词 小菜蛾 氨肽酶基因 基因分析 原核表达 酶活性 配体印迹 同源建模
中图分类号 文献标识码 文章编号
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