荒漠昆虫小胸鳖甲RasGTP酶激活蛋白基因MpRasGAP的克隆及低温表达分析.pdfVIP

： 昆虫 学 报ＡｃｔａＥｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，Ａｐｒｉｌ２０１５，５８（４）３６７－３７４ ｄｏｉ：１０１６３８０／ｊｋｃｘｂ２０１５０４００２ 荒漠昆虫小胸鳖甲ＲａｓＧＴＰ酶激活蛋白基因 ＭｐＲａｓＧＡＰ的克隆及低温表达分析 阮梦鸽，李洁琼，孟闪闪，马　纪 （新疆大学生命科学与技术学院，新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐８３００４６） 摘要：【目的】丝裂原活化蛋白激酶 （ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）级联是细胞的重要信息传递系统之 一，ＲａｓＧＴＰ酶激活蛋白（ＲａｓＧＴＰａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＲａｓＧＡＰ）基因ＲａｓＧＡＰ和 ｃＪｕｎ氨基末端激酶（ｃＪｕｎＮ ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ，ＪＮＫ）基因ＪＮＫ分别是ＭＡＰＫ信号转导途径的上、下游基因。本研究旨在确定荒漠昆虫小胸鳖甲 ＭｉｃｒｏｄｅｒａｐｕｎｃｔｉｐｅｎｎｉｓＲａｓＧＡＰ及ＪＮＫ基因对低温的响应情况。【方法】从荒漠甲虫小胸鳖甲中克隆获得ＲａｓＧＡＰ基 因的ｃＤＮＡ序列，利用生物信息学分析软件分析其氨基酸序列并构建进化树，利用实时荧光定量ＰＣＲ检测低温胁 迫条件下 ＲａｓＧＡＰ和ＪＮＫ基因的表达情况。【结果】小胸鳖甲ＲａｓＧＡＰｃＤＮＡ的开放阅读框 ２５２３ｂｐ，命名为 ＭｐＲａｓＧＡＰ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＭ６７７９３０），编码 ８４０个氨基酸，分子量 ９６．５９４ｋＤａ，编码蛋白ＭｐＲａｓＧＡＰ属于 ＲａｓＧＡＰ超家族。ＭｐＲａｓＧＡＰ与赤拟谷盗 ＴｒｉｂｏｌｉｕｍｃａｓｔａｎｅｕｍＲａｓＧＡＰ的氨基酸序列一致性达８９％。小胸鳖甲在 ４℃和－４℃低温胁迫１ｈ后，ＭｐＲａｓＧＡＰ的ｍＲＮＡ水平都显著高于室温对照（２５℃）。小胸鳖甲在４℃处理３ｈ或－ ４℃处理１ｈ后，ＭｐＪＮＫ的ｍＲＮＡ水平也显著升高。【结论】本研究结果表明小胸鳖甲ＭｐＲａｓＧＡＰ和ＭｐＪＮＫ的 ｍＲＮＡ水平受低温诱导。研究结果有助于深入研究荒漠昆虫在低温下ＭＡＰＫ信号转导途径的作用机制。 关键词：小胸鳖甲；低温胁迫；ＲａｓＧＴＰ酶激活蛋白；基因克隆；ｍＲＮＡ水平；实时定量ＰＣＲ 中图分类号：Ｑ９６６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：０４５４６２９６（２０１５）０４０３６７０８ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆＲａｓ ＧＴＰａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅＭｐＲａｓＧＡＰｉｎｔｈｅｄｅｓｅｒｔｂｅｅｔｌｅＭｉｃｒｏｄｅｒａ ｐｕｎｃｔｉｐｅｎｎｉｓ（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ：Ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｄａｅ）  ＲＵＡＮＭｅｎｇＧｅ，ＬＩＪｉｅＱｉｏｎｇ，ＭＥＮＧＳｈａｎＳｈａｎ，ＭＡＪｉ（ＸｉｎｊｉａｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ ＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＧｅｎｅｔｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｕｒｕｍｑｉ８３００４６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ａｉｍ】Ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ（ＭＡＰＫ）ｃａｓｃａｄｅｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｓｉｎｃｅｌｌｓ．ＲａｓＧＴＰａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ（ＲａｓＧＡＰ）ｇｅｎｅＲａｓＧＡＰａｎｄｃＪｕｎＮ ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ（ＪＮＫ）ｇｅｎｅＪＮＫａｒｅａｎｕｐｓｔｒｅａｍｇｅｎｅａｎｄａｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｇｅｎｅｉｎＭＡＰＫｐａｔｈｗａｙ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｉｓｓｔｕｄｙａｉｍｓｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆＲａｓＧＡＰａｎｄＪＮＫｉｎｔｈｅｄｅｓｅｒｔｂｅｅｔｌｅ Ｍｉｃｒｏｄｅｒａｐｕｎｃｔｉｐｅｎｎｉｓｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒ