健脾活血祛湿方肝硬化腹水大鼠肝AQP8、9和线粒体的影响.pdfVIP

摘 要 研究目的： 肝硬化腹水是许多肝脏疾病终末期(失代偿期)的常见并发症，一旦腹水形成， 对人体健康影响极大，祖国医学中并无此病名记载，可将其归属于“鼓胀”、“积聚”、 等范畴，对症支持治疗是临床主要治疗手段，但治疗效果一般。导师刘友章教授运用 “肝病实脾”、“脾一线粒体相关”理论为指导，结合多年临床经验，自拟健脾活血祛 湿方对本病进行治疗，方中药物多为岭南道地药材，极具特色，且通过大量实践，证 实该方临床疗效显著。本课题主要通过动物实验进一步验证健脾活血祛湿方的疗效， 并通过对肝AQP8、9，线粒体等指标的比较观察来更为深入的探究健脾活血祛湿方治 疗肝硬化腹水的疗效机制，同时通过实验研究，为运用岭南道地药材在治疗本病中的 应用提供更多的科学和实验依据。 研究方法： 本课题由文献及实验研究两部分组成。在第一部分文献研究中，我们先详细总结 和整理了古代中医对肝及肝硬化腹水(鼓胀)的认识和研究，后又对肝硬化腹水发生 机制、治疗概况及肝硬化腹水动物模型的研究进行了分析、整理。 白组(A组)，剩余80只大鼠依据CCL4-酒精综合法进行肝硬化腹水造模。造模第1 天，除了空白组，其余大鼠均以四氯化碳行腹部皮下注射，注射剂量以5ml／Kg体重 折算。造模第2天开始，将按4：6比例配置的四氯化碳一橄榄油混合溶液用于大鼠腹 部皮下注射，注射剂量以3mL／Kg体重折算，间隔3天注射一次。根据体重变化随时 调整注射剂量，每周进行一次体重测量。而空白组大鼠则使用相同容量的橄榄油进行 腹部皮下注射。实验过程中，将配置好的医用酒精溶液(用蒸馏水加75％医用酒精配 置，浓度10％)作为造模大鼠的饮用水。大鼠进食不予控制，以普通饲料喂养。直至 模型组大鼠肝硬化腹水形成。第8周后，造模大鼠还剩65只大鼠，根据成膜标准， 对大鼠行诊断性穿刺确定50只伴有腹水，再将腹水大鼠随机分为五组(各组10只) 进行灌胃治疗。空白组(A组)和模型组(B组)两组给予等容量的生理盐水灌胃， 其余三组分别予健脾活血祛湿方灌胃，分别是健脾活血祛湿方高剂量组(C组)，剂量 体重折。共灌胃4周，每日灌胃1次。整个实验过程中，观察记录大鼠活动情况、精 神状态变化、摄食量的改变、体重变化，毛皮状况，大便情况等。各组分别于用药治 疗4周，实验持续12周后，观察大鼠腹水消退程度，进行腹水量测定，抽取大鼠门 AQP9PCR定量、Western Blotting检测、ICH检测、肝线粒体细胞色素C氧化酶活性、 ATP含量、ATP酶活性测定，观察其表达变化，统计分析数据。 研究结果： 1．动物一般情况 本实验造模大鼠死亡率为18．75％，腹水形成率为76．92％。造模大鼠出现烦躁不 安、毛色渐杂乱而无泽，活动减少，饮食减少，体重减轻，大部分大鼠粪便软而臭。 在开始治疗后，治疗组大鼠上述情况均有不同程度改善。 2．大鼠腹水消退情况 A组大鼠未出现腹水，B、F组大鼠腹水较多，腹水呈淡黄色；C、D、E组大鼠腹 水量显著减少，腹水呈淡黄色，与B组比较，差异显著(PO．01)。F组与B组比较， 差异无统计学意义(PO．05)。 3．肝功能相应指标检测结果 组ALB降低，与空白组相比，差异显著(PO．01)；健脾活血祛湿方干预后，各组大鼠 ALT、AST均降低，且ALB增高，效应与秋水仙碱组相同；其干预程度与中药使用剂量 相关，健脾活血祛湿方高剂量组干预效果最显著，与空白组相比差异无统计学意义 (PO．05)，而健脾活血祛湿方中、低剂量组及秋水仙碱组各指标分别与空白组相比， 差异显著(PO．01)。 4．健脾活血祛湿方对各组大鼠肝组织水通道蛋白8的影响 Blotting 湿方高剂量组与模型组比较，AQP9蛋白表达量显著增高(PO．01)；Western 结果显示健脾活血祛湿方高剂量组表达较模型组明显升高(PO．01)，健脾活血祛湿 方中剂量组AQP8表达较模型组略有升高，但差异无统计学意义(PO．05)，健脾活血 祛湿方低剂量组AQP8表达低于模型组。秋水仙碱组与模型组比较差异有统计学意义 (PO．05)可见，AQP8基因及蛋白表达升高程度与中药使用剂量有关。 5．健脾活血祛湿方对各组大鼠肝组织水通道蛋白9的影响 达与模型组差异有统计学意义(PO．05)；免疫组化结果显示模型组AQP9少量表达， 与空白组比较，AQP9蛋白表达量有显著差