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一、根系活力的测定方法 【仪器与用具】 分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；恒温箱1台；研钵1套；100ml三角瓶；漏斗；移液管10ml 1支、2ml 1支、0.5ml 1支；20ml刻度试管；10ml容量瓶；小培养皿；试管架，药匙；石英砂适量。 【试剂】 乙酸乙酯；连二亚硫酸钠（Na2S2O4，为强还原剂，俗称保险粉）；1%TTC溶液：准确称取TTC 1.0g，溶于少量蒸馏水中，定容至100ml；0.4%TTC溶液：准确称取TTC 0.4g，溶于少量蒸馏水中，定容至100ml与0.1mol/LpH7.5PBS等量混合；磷酸缓冲液PBS（0. 1mol/L，pH7.5）；1mol/L硫酸：用量筒量取比重1.84的浓硫酸（浓度为98%）55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml； 【方法】 ?定量测定： （1）TTC标准曲线的制作? ?吸取0.25ml 0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶，加少许Na2S2O4粉末，摇匀后立即产生红色的TTF。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。此即为100ug/ml的标准液。 取5个10ml容量瓶，编号，按下表加入试剂 编号 1 2 3 4 5 标液 0.25 0.50 1.00 1.50 2.00 乙酸乙酯（ml） 定容至10ml TTF含量（ug/ml） 25 50 100 150 200 摇匀，乙酸乙酯调零，在485nm波长下测定光密度，并以调零点为第1个测定点。以TTF含量ug为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 （2）称取根样品0.5g，放入小培养皿（空白试验先加硫酸再加入根样品，其他操作相同），加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。 （3）把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把红色提出液移入试管，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在485nm下比色，以乙酸乙酯调零，查标准曲线，求出四氮唑还原量。 【计算】 将所得数据带入下式，求出四氮唑还强度。 四氮唑（TTC）还原强度=四氮唑（TTC）还原量（ug）/［根重（g）×时间（h）］ 二、叶绿素含量的测定 【实验材料】 植物叶片 【实验仪器与用品】 分光光度计、毛刷、剪刀、研钵、漏斗、滤纸、容量瓶 【实验试剂及药品】 80%的丙酮、碳酸钙、石英砂 【实验步骤】 1、选取适当的叶片，用毛刷刷去表面的尘土，用打孔器打取3个叶圆片，立即称重，剪碎后放入研钵中。注意取样时应避开较大的叶脉。 2、研磨提取 向研钵中加入80%的丙酮2.5ml，以及少量的碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加入3ml的80%丙酮，继续研磨至组织变白，在暗处静止3~5分钟用干净的滤纸过滤到25ml的容量瓶中，用少量的丙酮溶液将研钵清洗，清洗液也要过滤到容量瓶中，并用丙酮沿滤纸的周围洗脱色素，待滤纸和残渣变白后，用80%丙酮定容至刻度线。 3、读取吸光度 第一个比色皿中装80%的丙酮作为对照，测定波长为652nm的吸光度。 结果计算： C=(A652×1000)/34.5 叶绿素含量（mg.g-1）μg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。当日配制使用。 3.材料：淀粉 二、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml） 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg） 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）（μg））───────────── × 100 W × V测 × 106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）总体积（ml）测定时取用体积（ml）D——稀释倍数W——样品重量（g）106——样品重量单位由g换算成μg的倍数 叶片,用去离子水冲洗干净,充分研磨致碎(每个品种重复3次) 仪器设备及用品：分光光度计、冰冻离心机、水浴锅、光照培养箱、10ml小烧杯等 【药剂药品】 0.05mol/L pH7.8的磷酸缓冲液（PBS）（含0.1mmol/L EDTA） 提取缓冲液