生物工艺学培养基及制备解析.doc

第三章 培养基及制备 第一节 培养基选择和配制的原则 培养基定义：是提供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的、按一定比例配制的多种营养物质的混合物。 适宜大规模发酵的培养基应该具备的共同特点： ①培养基中营养成分的含量和组成能够满足菌体生长和产物合成的需求 ②发酵副产物尽可能地少 ③培养基原料价格低廉，性能稳定，资源丰富，便于运输和采购 ④培养基的选择应能满足总体工业的要求 一、培养基的类型和用途 1．根据来源，可分为天然、合成和半合成培养基。 天然培养基是采用化学成分不清楚或化学成分不恒定的各种植物、动物组织或微生物的浸出物、水解液等物质（例扣牛肉膏、酵母膏、麦芽汁、蛋白胨等）制成的。合成培养基是使用化学成分和数量完全了解的物质配制而成的，成分精确，重复性强，可以减少不能控制因素。半合成培养基（semidefined medium）为既含有天然成分又含有纯化学试剂的培养基。从物理形状培养基又可分为液体、固体和半固体培养基。 2．根据主要成分或使用目的可分为基础、增殖、鉴别和选择培养 鉴别培养基（differential medium）是培养基中加有能与某一菌的无色代谢物发生显然反应的指示剂，从而用肉眼区别于该菌与其他菌。选择培养基（selected medium）是根据某种生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。 3．根据生产工艺的要求可分为孢子、种子和发酵培养基 孢子培养基（spore medium）是供制备孢子用的培养基，种子培养基是满足菌种生长的培养基，发酵培养基是满足大生产中大量菌体生长和繁殖以及代谢产物积累的营养基质。 二、培养基的选择 发酵培养基选择的依据： 不同的微生物对培养基的需求是不同的，因此，不同微生物培养过程对原料的要求也是不一样的。 1．根据微生物的特点选择培养基 要依据微生物的不同特性，来考虑培养基的组成，对典型的培养基配方需作必要的调整。 2．根据发酵方式选择培养基 工业上，利用液体培养基进行的深层发酵具有发酵效率高，操作方便，便于机械化、自动化，降低劳动强度，占地面积小，产量高等优点。而固体培养基则常用于微生物菌种的保藏、分离、菌落特征鉴定、活细胞数测定等方面。 3．从生产实践和科学试验的不同要求选择 种子培养基主要是供微生物菌体的生长和大量增殖。要求营养丰富、完全，氮源、维生素的比例应较高，所用的原料也应是易于被微生物菌体吸收利用。常用葡萄糖、硫酸铵、尿素、玉米浆、酵母膏、麦芽汁、米曲汁等作为原料配制培养基。而发酵培养基除需要维持微生物菌体的正常生长外，主要是要求合成预定的发酵产物，碳源物质的含量往往要高于种子培养基。如果产物是含氮物质，应相应地增加氮源的供应量。 4．从经济效益方面考虑选择生产原料 必须以价廉、来源丰富、运输方便、就地取材以及没有毒性等为原则选择原料。 三、培养基的配制原则 1．根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基 根据不同生产菌种的培养条件、生物合成的代谢途径、代谢产物的化学性质等确定培养基。 2．营养成分的恰当配比 微生物所需的营养物质之间应有适当的比例，培养基中的碳氮的比例（C/N）的积累；氮源不足，则微生物菌体生长过于缓慢。碳源供应不足时，容易引起微生物菌体的衰老和自溶。不同的微生物菌种、不同的发酵产物所要求的碳氮比是不同的。 3．渗透压 营养物质的浓度太低，不仅不能满足微生物生长对营养物质的需求，而且也不利于提高发酵产物的产量，浓度过高时，培养基溶液的渗透压太大，会抑制微生物的生长。培养基中各种离子的比例需求要平衡。在发酵生产过程中，在不影响微生物的生理特性和代谢转化率的情况下，通常趋向在较高浓度下进行发酵，以提高产物产量，并尽可能选育高渗透压的生产菌株。 4．pH值 一般霉菌和酵母菌比较适于微酸性环境，放线菌和细菌适于中性或微碱性环境。当培养基配制好后，若pH值不合适，必须加以调节。同时加入缓冲剂，以调节培养液的pH值。 5．氧化还原电位 对于厌氧菌，由于氧的存在对其有毒害作用，因而往往在培养基中加入还原剂以降低氧化还原电位。 除应注意以上几条原则外，还要考虑到营养成分的加入顺序，为了避免生成沉淀而造成营养成分的损失，加入的顺序一般为先加入缓冲化合物，溶解后加入主要物质，然后加入维生素、氨基酸等生长素类的物质。 培养基成分配比的选择 1.菌体的同化能力 2.代谢物的阻碍与诱导作用 3.合适的碳氮比 由于碳既做碳架又作能源，所以用量要比氮多。从元素分析来看，酵母细胞中碳氮比约为100:20，霉菌约为100:10。一般发酵工业中碳氮比约为100: (0.2~2.0)，但在氨基酸发酵中，碳氮比就相对高一些。如谷氨酸发酵的C:N = 100: (15~21)。 培养基各成分用量的多少，大部分是根据经验而来。但有些主要代谢产物因为它