内含肽介导的重组酶Cre拆分及在拟南芥中的删除活性的研究.pdfVIP

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2016-03-28 发布于安徽
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内含肽介导的重组酶Cre拆分及在拟南芥中的删除活性的研究.pdf

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目录目录摘要………………………………………………………………………………………………………………．1 ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………．III 第1章文献综述……………………………………………………………………。l 1．1植物转基因技术概况……………………………………………………………1 1．2转基凶植物安全性问题及解决途径……………………………………………．2 1．2．1转基因植物生物安全性问题………………………………………………．2 1．2．2解决途径……………………………………………………………………．．3 1．3位点特异性重组酶系统…………………………………………………………5 1．3．1研究现状……………………………………………………………………．5 1．3．2 cre／loxp系统作用原理及应用………………………………………………5 1．4内含肽介导的蛋白拆分技术研究进展…………………………………………7 1．4．1内含肽概述…………………………………………………………………一8 1．4．2内含肽的作用机理及应用…………………………………………………．9 1．4．3 DnaEintein……………………………………………………………．．12 Ssp 第2章引言…………………………………………………………………………15 2．1研究目标…………………………………………………………………………15 2．2研究内容…………………………………………………………………………15 2．3技术路线…………………………………………………………………………16 第3章材料与方法…………………………………………………………………17 3．1材料………………………………………………………………………………………………………．．17 3．1．1植物材料……………………………………………………………………17 3．1．2菌株和质粒…………………………………………………………………17 3．1．3主要仪器设备………………………………………………………………17 3．1．4购买的试剂及试剂盒………………………………………………………17 3．1．5抗生素与激素………………………………………………………………18 3．1．6培养基………………………………………………………………………18 3．1．7其它试剂的配制……………………………………………………………19 3．2方法………………………………………………………………………………………………………．．20 3．2．1质粒提取(碱裂解法)……………………………………………………20 3．2．2大肠杆菌感受态细胞制备和转化…………………………………………21 3．2．3农杆菌感受态细胞制备和转化……………………………………………21 西南大学硕士学位论文 3．2．4植物表达载体的构建………………………………………………………．22 3．2．5烟草遗传转化………………………………………………………………．25 3．2．6转基因烟草毛状根的分子鉴定……………………………………………．25 3．2．7转基冈烟草毛状根的GUS组织染色………………………………………26 3．2．8删除效应测序分析…………………………………………………………．26 3．2．9拟南芥的遗传转化…………………………………………………………．26 3．2．10转基因拟南芥单拷贝纯合体的筛选………………………………………27 3．2．11拟南芥叶片总RNA的提取………………………………………………27 3．2．12拟南芥GUS染色…………………………………………………………．．28 3．2．13 GUS酶活性的定量分析…………………………………………………一28 3．2．14拟南芥的杂交方法…………………………………………………………29 第4章结果与分析………………………………………