Marc-145细胞库的建立及其生物学特性研究.pdfVIP

第35卷总第93期 西北民族大学学报(自然科学版) V01．35．No．1 2014年3月 JournalofNorthw锫t forNationalities(NaturalScience) March，2014 University Marc一1 45细胞库的建立及其生物学特性研究 令世鑫1，沈武玲2，徐水林1，马桂兰1，魏园园2，王家敏1，乔自林1，马忠仁1’2+ (1．甘肃省动物细胞工程技术研究中心，甘肃兰州730030；2．生物工程与技术国家民委重点实验 室，甘肃兰州730030) 并对工作细胞库的细胞复苏后进行了活力、形态、生长特性、微生物污染、核型、乳酸脱氢酶同工酶和对猪繁殖与呼吸综 合征病毒(Pl氓Sv)敏感性等特性进行了鉴定．结果显示，MKrc一145细胞为上皮型细胞，生长状态良好，生长曲线呈“S” 型，最大增殖浓度为4．71X105／mL，倍增时间为26．1h，细菌、真菌、支原体和红细胞吸附检测均为阴性，染色体核型为 2靠=60，对PRRSV敏感．建立的细胞，为开展猪繁殖与呼吸综合征病毒及其疫苗研究提供了细胞资源． [关键词]Marc一145细胞；细胞库；生物学特性 【中图分类号]Q813．11【文献标识码]A 【文章编号】1009—2102(2014|01—0069—06 Marc一145细胞是恒河猴胚肾上皮细胞，贴壁生长，可连续传代．该细胞系是1993年KimHS[1J等 and 利用限制稀释法从MA一104细胞克隆得到，并证明猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive respiratory bronchitis 毒(Infectiousvirus，IBV)t2]和猪细小病毒(Porcinevirus，PPV)[3]的体外增殖．目 parvovirus 前，该细胞系主要用于研究和生产PRRS病毒及其疫苗． 开展猪繁殖与呼吸综合征病毒及其疫苗研究提供可靠的细胞资源． 1材料和方法 1．1细胞和病毒 1．1．1Marc一145细胞 从中国典型培养物保藏中心(cCTCC)引进并保存． 1．1．2PRRS病毒 TJM—F92毒株，新疆天康畜牧生物技术股份有限公司保存． 1．2细胞培养及鉴定用材料 (DIFCO)，THIO培养基(DIFCO)，秋水仙素(Sirius进口分装)． 、 [收稿日期】2014—01—20 2013GS08044)；兰州市科技计划项目(2013—4—101)． [通讯作者】* [作者简介]令世鑫(1964一)，男，甘肃通渭人，工程师，主要从事兽医生物制品方面的开发研究． 一69— 万方数据 1．3主要设备 10型COz培养箱 (Therrno)，液氮罐，超净工作台等． 1．4方法 I．4．1细胞弓f进及细胞冻存 库．冻存程序为首先在4℃层析柜放置约2 h，再置于一80℃冰箱中过夜，最后直接置于液氮罐中．之 后逐步建立主细胞库和工作细胞库． 1．4．2生物学特性研究 1．4．2．1复苏细胞从工作细胞库中取出细胞，39℃温水中快速融化，移入培养瓶中，加入适量培养 液，2h后换加等量的新鲜完全培养基． 1．4．2．2活力检测完成细胞复苏后，取少量细胞悬液，台盼蓝染色法进行细胞活力测定【4I． 1．4．2．3形态观察培养过程中用显微镜观察细胞的生长形态并拍照． mL接种到24孔培养板上，置于37℃的c02培养箱中培养，每隔24h消化3孔计数细胞量，直至细胞