sscp实验操作.ppt

* PCR-单链构象多态性 (PCR-single-strand conformation polymorphism，SSCP) 单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象，这种立体结构主要是由 其内部碱基配对、氢键等分子内相互作用力来维持的，当有一个碱基发生改变时，会或多或 少地影响其空间构象，使构象发生改变，空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中受排阻大小不同。因此，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，可以非常 敏锐地将构象上有差异的分子分离开。该方法即为单链构象多态性 (Single-Strand Conformation Polymorphism，SSCP)分析。 基本原理 将SSCP用于检查PCR扩增产物的基因突变，建立PCR-SSCP技术。 基本过程： ①PCR扩增靶DNA; ②将特异的PCR扩增 产物变性，而后快速复性，使之成为具有一定空间结构的单链DNA分子； ③将适量的单链DNA进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳; ④最后通过放射性自显影、银染或溴化乙锭显色分析结果。 若发现单链DNA带迁移率与正常对照的相比发生改变，就可以判定该链构象发生改变，进而推