、免疫细胞的分离与检测.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 细胞凋亡 二、细胞凋亡的检测方法 1、形态观察法：凋亡的细胞皱缩，质膜完整，胞浆致密，细胞器密集，不同程度退变；核染色质致密，形成形状不一，大小不等的团块边集于核膜处，进而胞核裂解；胞浆发生芽突。胞浆芽突脱落后，形成许多凋亡小体。 2、生化检测法： ①胞浆内Ca2+浓度升高。②细胞内活性氧增多。③质膜通透性增高。④DNA内切酶被激活，双链DNA在核小体之间切断形成180~200bp的特征性的有序片段。⑤Ⅱ型谷氨酰胺转移酶和钙蛋白酶（Calpain）活性升高。 3、流式细胞仪检测法 1、形态观察法 （1）普通光镜检测 HE染色 甲基绿-派诺宁染色：细胞凋亡是一种细胞主动死亡过程，需要有细胞内蛋白酶的激活，细胞质内常有mRNA表达的增强。而细胞坏死是一种被动的细胞死亡过程，细胞质内常有RNA的损失。根据这一特点，可应用试剂甲基绿对DNA染色的特异性和派诺宁对RNA的亲和性，使甲基绿对固缩细胞核内的脱氧核糖核酸着染，如果细胞质内核糖核酸呈派诺宁阳性染色者为凋亡细胞，呈阴性染色者为坏死细胞。 二、细胞凋亡的检测方法 甲基绿-派诺宁染色：光学显微镜下凋亡细胞和坏死细胞均表现为细胞固缩：其中凋亡细胞细胞核呈绿色或