仪器分析实验内容(一).doc

邻二氮菲分光光度法测定试样中的微量铁 一、实验目的 1．掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理 2．熟悉绘制吸收曲线的方法，正确选择测定波长 3．学会制作标准曲线的方法 4．通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，掌握721型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。 二、实验原理 邻二氮菲（phen）和Fe2+在pH3~9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen)，其lgK=21.3，ε508=1.1×104 L·mol-1·cm-10.1~6μg·mL-1范围内遵守比尔定律。显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。有关反应如下： ==== ↑+ 2H2O + 4H+ + 2Cl- 用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度A，以溶液的浓度C为横坐标，相应的吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度Ax，根据测得吸光度值Ax从标准曲线上查出相应的浓度值Cx，即可计算试样中被测物质的质量浓度。 三、仪器和试剂 1．仪器 721型分光光度计，1 cm比色皿。 2．试剂 （1）100 μg·mL-1铁标准储备溶液。 （2）100 g·L-1盐酸羟胺水溶液。用时现配。 （3）0.1% 邻二氮菲水溶液。避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。 （4）pH=5.0的乙酸-乙酸钠溶液。 四、实验步骤 1．显色标准溶液的配制 在序号为1~6的6只50 mL容量瓶中，用吸量管分别加入0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL铁标准使用液（含铁约100μg·mL-1），分别加入1.00 mL 100 g·L-1盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min，再各加入5.0 mL乙酸-乙酸钠溶液，3.00 mL 0.1% 邻二氮菲溶液，以水稀释至刻度，摇匀。 2．吸收曲线的绘制 在分光光度计上，用1 cm吸收池，以试剂空白溶液（1号）为参比，在480~540 nm之间进行扫描，测定待测溶液（如5号）的吸光度A，得到以波长为横坐标，吸光度为纵坐标的吸收曲线，从而选择测定铁的最大吸收波长λmax。 3．标准曲线的测绘 以步骤1中试剂空白溶液（1号）为参比，用1 cm吸收池，在选定波长下测定2~6号各显色标准溶液的吸光度。以铁的浓度(μg.mL-1)为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 4．铁含量的测定 移取试样溶液（7号）1.5mL,按步骤1显色后，在相同条件下测量其吸光度Ax，由标准曲线上查出对应的Cx，再进一步计算试样中微量铁的质量浓度CFe。 五、数据记录与处理 1．以吸光度为纵坐标，波长为横坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长λmax，并计算其εmax。 2．以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。然后，根据试样吸光度在标准曲线上查出相对应的浓度值，计算出试样中铁的含量（μg·mL-1 ）。 六、思考题 1．用邻二氮菲测定铁时，为什么要加入盐酸羟胺？ 2．吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？ 3．测绘标准曲线和测定试液时，为什么要以试剂空白溶液为参比？ 紫外分光光度法测定水中总酚的含量 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器与试剂 四、实验步骤 五、数据记录与处理 六、思考题 分子荧光实验目的1．了解仪器的性能与结构熟悉仪器的操作步骤2．学会绘制激发光谱和荧光谱图（即确定最大的和Em）、实验原理在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度呈正比：IkC 三、仪器仪器：日本公司F-型荧光分光光度计。试剂：L-1荧光素储备液四、实验步骤1．溶液的配制取只mL容量瓶，加入mL荧光素储备液（5×10-4mol·L-1），稀释至刻度，摇2．绘制激发光谱和荧光发射光谱在00~600 nm范围内扫描发光谱X的干扰)，从谱图找出最大λEm值； 将λEM固定在450 nm,选择合适的实验条件,在200400 nm范围内扫描光谱M的干扰)，从谱图找出最大λEX值. 四、 保存所测得的激发光谱和荧光发射光谱五、思考题 ．如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？．哪些因素可能会对荧光产生影响？附：使用操作指南 721型分光光度计允许的测定波长范围在360～800nm，其构造比较简单，测定的灵敏度和精密度较高。因此，应用比较广泛。721型分光光度计操作方法： （）仪器的电源开关接通（接220V交流电），打开比色槽暗箱盖，使电表指针处于“0”位，预热20分钟后，再选择需用的单色光波长和相应的放大灵敏度档，用调零电位器校正电表“0”位。 （）将仪器的比色槽暗箱合上，比色槽座处于蒸馏水校正位子，使光电管见光，旋转光量调节器调节光电管输出的光电讯号使电表指针正