第十六节血红蛋白的提取和分离(一).docVIP

　　 血红蛋白的提取和分离（一） 主讲：黄冈中学优秀生物教师　王小敏 ★课题目标 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白； 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。 ★课题重点 凝胶色谱法的原理和方法。 ★课题难点 样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 一、基础知识 （一）蛋白质提取和分离的原理 　　根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 （二）凝胶色谱法（分配色谱法） 1、概念：根据蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶，来进行分离的方法。 2、原理： 　　大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快； 　　小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。 3、凝胶材料：微小的多孔性球体，如葡聚糖或琼脂糖。内部有许多贯穿的通道。 4、分离过程： 　　洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 （三）缓冲溶液 1、作用：能够抵制外界的酸和碱对溶液pH值的影响，维持pH基本不变。 2、缓冲溶液的配制： 　　由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等。调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 　　在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是pH=7.0的磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境