高效液相色谱维护要点.ppt

* 赛默飞世尔科技 * 赛默飞世尔科技 * 赛默飞世尔科技 * 赛默飞世尔科技 * 赛默飞世尔科技 * 赛默飞世尔科技 * We (should) know this picture – and the modules – already from the ‘HPLC Basics’ presentation. Now we will have a closer look at the pump and the degasser. * 赛默飞世尔科技 * 赛默飞世尔科技 保留时间不稳定 吸滤头脏 泵输液不正常（压力波动、气泡等） 流动相组分变化 流动相缓冲能力不够 色谱柱平衡时间不够 柱温的变化 柱子问题 噪音大 流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 漏液 流动相、泵、检测器流通池内有气泡 流动相各溶剂不相溶或混和不均匀 检测池能量不足 流通池被污染 温度影响（检测器和柱温差别太大） 其他电子设备的影响或电源、地线等 流动相污染，变质或由低品质溶剂配成 流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂) 温度波动 系统平衡时间不够 流通池被污染或有气泡 流通池窗口破裂 基线漂移 峰形问题 死体积太大 柱子被污染或堵塞 色谱柱塌陷 色谱柱化学或次级保留（硅羟基效应或重金属污染） 流动相缓冲不足或不合适 样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大 样品过载（浓度或体积） 柱温过低 鬼峰 检测器基线异常 HPLC通用注意事项 第三部分 接头 死体积 ? 死体积可能会引起分离度变差和重现性变差等问题. 好的连接 差的连接 流动相 选择原则 采用“HPLC”级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 流动相 溶剂的等级 流动相 纯化水中去除了无机和有机的污染物 流动相 缓冲液 流动相的更换 33 溶剂前处理 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱， 尤其是使用无机盐配制的缓冲液时。 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜： 不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜： 适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸， 不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂 33 Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited 溶剂前处理 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱， 尤其是使用无机盐配制的缓冲液时。 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸， 不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂 7725i手动进样阀 原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入 ? 手动进样器(7725/7725i） 手动进样器 手动进样器的原理图 7725/7725i手动进样器结构图 交叉污染的原因 红色表示残留样品 进样口清洗 （1）将附件进样口清洗器连接在针管上， 不应使用微型注射器清洗。 （2）清洗液（试样溶剂或不含盐的流动相 等）用注射器吸入 （3）在进样状态下，将针孔清洗器压接在 针导管上，流入清洗液1ml左右 （4）使用缓冲盐后，用水清洗流路和针孔 （5）清洗液可能反喷，因此注射器应慢慢 地推压 手动进样器 操作注意点： 1）进样时，进样针应插到底 2）不使用时将针头留在进样器内 3）进样应使用液相色谱专用平头 进样针 4）样品溶液pH小于10, 常用密封垫的 Vespel材质，适用pH10, 否则换Tefzel或 PEEK材质的密封垫pH 0-14 5）清洗应使用专用针口清洗器 故障处理 定子面漏液 调紧压力调整螺钉，如果不成功则应更换转子或定子面组件 针密封漏液 从进样口取出针，用铅笔的橡皮头将针导管轻轻 压入 色谱柱的日常保养 购买新柱后一定要仔细阅读说明书，确认柱的使用条件以及清洗 再生步骤，按照说明书条件测试色谱柱柱效，记录使用压力 定期检测柱压和柱效 不同流动相之间转换时应注意溶剂的互溶性 确认样品不会在流动相中析出或带有固体不溶物，请使用0.45um 或0.2um的一次性滤膜过滤样品，或者进行前处理。 为了延长色谱柱使用寿命，请使用保护柱。 定期用合适的溶剂清洗或再生色谱柱 长期不用时，清洗干净后，使用柱子说