农产品中呕吐毒的酶联免疫检测方法的研究.pdfVIP

摘 要 本论文研究建立了农产品中呕吐毒素的酶联免疫检测方法(ELIsA)。 首先，选择琥珀酸酐作为连接臂，构建了有效的呕吐毒素半抗原结构，采用活化 酯法将半抗原与牛血清白蛋白(BsA)偶联制备了免疫原，采用碳二亚胺法将半抗原 分别与卵清白蛋白(OVA)和辣根过氧化物酶(Hl冲)偶联，制备了包被原和酶标抗 原。通过免疫日本大耳白兔获得了具有较高效价和特异性的呕吐毒素抗血清，采用免 疫亲和层析法纯化获得了抗呕吐毒素的多克隆抗体。 进一步通过对ELISA各种条件的优化，建立了呕吐毒素直接竞争ELIsA标准曲 雪腐镰刀菌烯醇)和其它三种毒素赭曲霉毒素A(叽A)、■2毒素、玉米赤霉烯酮(ZEN) 均无交叉反应，说明抗体具有较高的特异性。 在建立直接竞争ELIsA的基础上，选取了大麦、小麦、燕麦、玉米、大米、面粉、 饲料、牛奶和牛肉九种样品作为研究对象，优化建立了各种基质影响消除方法。结果 表明：牛奶离心后直接用PBS稀释，其它样品用纯水提取后离心，再用PBS稀释一 m眺g三个添加水平上的回收率为70‰loo％，说明上述样品处理方法准确有效。论 文通过采用经典的呕吐毒素高效液相色谱检测方法与所建立的直接竞争ELISA方法 进行了比较，结果显示：同一样品的两种方法检测结果的线性相关系数R2=O．9613， 进一步验证了本论文所建立的呕吐毒素直接竞争ELISA方法的准确性。 在方法的实际应用中，样品涉及谷物、饲料、牛乳及畜产品，建立了简单高效的 配套前处理方法，样品的检测限最高为0．48m眺g，均低于国家相关标准中规定的 lII舭g的最高限量值，能满足多种农产品中呕吐毒素快速检测的需要。 关键词：呕吐毒素；农产品；直接竞争酶联免疫分析法；高效液相色谱 ABSTRACT Adirect immullosorb饥t tlle comp鲥tiVee舷yme-liIll(ed of detl黝ination intllis deoxyIIiValenol(DoN)ina鲥culturalproductsw鹤dcVeloped pap既 Firstly’me w弱髑edforme ofthe CouplingageIlt，succiIlica11：hydride syIlmesis h印ten 3一HS-DON．The aSch锄e actiVeeSter inunullogell w弱pr印arcdfollowing that锄ploys for memodthe oftlle Serum tlleEDC conjugationhapte鹅toBSA(BovineAlb啪in)，and w鹤瑚cdfortlle oftlle 嬲say C0坷ugation h印t％t0oVA(Alb啪in丘-0mCllick％E昭 W1lite)锄d HRP(Hors耐dishP啪xid嬲e)．Polyclonal锄tibodi髓agai粥tdeox河val∞ol we他raisedinrabbits afI盯iIIl毗ation研m imml呱log饥 n圯b碱sof ttleef|陌ctsofdi依托ntchcIIlical Secondly，on stud姐ng