明日叶查尔酮的备及其对小鼠H22肝癌血管生成的抑制作用研究.pdfVIP

明日叶查尔酮的制备及其对 小鼠H22 肝癌血管生成的抑制作用研究 摘要 目的研究建立从明日叶中提取查尔酮(Angelica keiskei Koidzumi chalcone ，英 文简称 AC) 的方法并制备实验样品。应用紫外光谱、红外光谱、高效液相色谱法等 技术手段检测明日叶查尔酮的含量及其结构特征；釆用动物实验的方法，观察明日 叶查尔酮对小鼠H22 肝癌血管生成的抑制作用。 方法 包括明日叶查尔酮的制备分析与对小鼠H22 肝癌血管生成的抑制作用等两 部分内容的实验方法： 1 明日叶查尔酮的提取、纯化与分析 1.1 明日叶查尔酮的提取 以新鲜明日叶为原料，经制浆→溶剂萃取→样品收集、处理→提取量检测及得 率计算等方法步骤获得查尔酮粗品，通过分别考察提取剂组分、料液比、提取时间、 温度及次数等单因素及其多因素（正交实验法）对提取效果的影响情况，最终筛选 出最佳提取工艺条件。 1.2 明日叶查尔酮的纯化 将提取的明日叶查尔酮粗品采用层析法，经醇溶→过滤→上柱吸附 （聚酰胺或 大孔树脂）→水洗→脱附→检验→浓缩→干燥等工艺处理后，获得明日叶查尔酮纯 品。 1.3 制备样品的分析 1.3.1 制备样品中查尔酮的含量测定 将纯化样品经硝酸铝显色测定吸光度，而后由芦丁标准样线性回归方程得出样 品中查尔酮的含量，进而计算提取得率和样品纯度。 回归方程：CX （mg/mL ）= （Y+0.0002 ）/0.484 C —样品中查尔酮浓度（mg/mL ） X Y—样品的吸光度A 提取得率：粗品（% ）=粗品重量/ 明日叶重量×100% 纯品（% ）=纯品重量/ 明日叶重量×100% 样品纯度：粗品（% ）=查尔酮含量/粗品重量×100% 纯品（% ）=查尔酮含量/纯品重量×100% 万方数据 1.3.2 制备样品的紫外光谱分析 用紫外光谱法测定制备的明日叶查尔酮样品的基本骨架结构。 1.3.3 制备样品的红外光谱分析 用红外光谱法测定制备的明日叶查尔酮样品的特征吸收峰。 1.3.4 制备样品的高效液相色谱分析 用高效液相色谱法测定制备的明日叶查尔酮样品的组分。 2 明日叶查尔酮对肝癌血管生成的抑制作用研究 2.1 动物实验方法 将原代H22 肝癌细胞接种于小鼠腹腔，在接种后第6 天，无菌条件下抽取腹水 并制备成肝癌细胞悬液，在每只受试小鼠的右腋窝处接种2mL 。设肿瘤对照组、低、 中、高剂量明日叶查尔酮组和恩度组共5 个组，每组10 只，雌雄各半。明日叶查尔 酮剂量组分别为5、25 、50 mg/kg，每天经口灌胃给药1 次，连续10 天。恩度组和 肿瘤对照组则给予生理盐水灌胃，恩度组腹腔注射恩度经口灌胃等量生理盐水 4 mg/kg 剂量。各组均在接种后第11 天摘眼球取血并处死动物，取瘤组织待检。 2.2 检测指标 2.2. 1 瘤质量和抑瘤率：用电子天平称取小鼠瘤重并计算得出抑瘤率。 抑瘤率= [肿瘤对照组瘤质量(g)-用药组瘤质量(g)]/肿瘤对照组瘤质量(g) ×100% 2.2.2 瘤细胞增殖活性：用四甲基偶氮唑 （MTT ）法检测各组小鼠肿瘤细胞的增 殖活性。 2.2.3 瘤组织中微血管密度（MVD ）、血管内皮生长因子（VEGF ）表达水平： 用免疫组化法检测。