深海嗜热噬菌体GVE2头尾连接蛋白EV8的原核表达与功能分析.pdfVIP

第 15卷 第 2期 生命科 学研 究 V01．15 N0．2 20l1年 4月 LifeScienceResearch Apr．2011 深海嗜热噬菌体 GVE2头尾连接蛋 白EV8的原核 表达和功能分析 周治东 ，金春英 ，吕 华 ，王 蔚 (1．国家海洋局第i海洋研究所 海洋生物遗传资源重点实验室，中国福建 厦门361005 2．华侨大学化工学院，中国福建 厦门361021) 摘 要 ：为了解头尾连接蛋 白在噬茵体感 染和装配 中起 的作 用，对高温噬茵体 GVE2 (virulenthaeteriophageof Geobacillussp．E263)的头尾连接蛋 白EV8进行 了原核表达 和功 能鉴 定．将 EV8编码序列克隆入 pGEX4T一2原 核表达载体 ，并转染大肠埃希 氏菌 BL21．诱导表达后用SDS—PAGE进行鉴定，显示获得相对分子质量约 36 kD的谷胱甘肽硫转移酶 (GST—EV8)融合蛋 白．Westernblot捡测发现 EV8在 GVE2感染后 2h开始表达 ．说 明该蛋 白为噬茵体 晚期表达蛋 白．免疫电镜定位表 明头尾连接蛋 白位于噬菌体头尾 的连接处 ，为进一步研 究 高温噬茵体的组装和表达调 控奠定 了基础 ． 关键 词 ：高温噬菌体 ：头尾连接蛋 白：EV8 中图分类号：Q78 文献标识码 ：A 文章编号：1007—7847(2ol1)02一叭15—04 ProkaryoticExpression and FunctionalCharacterization ofHead- tailJoiningProteinEV8from ThermophilicBacteri0phageGVE2 ZHOUZhi—dong，JINChun—ying，Lt?Hua，WANGWei (1．KeyLaboratoryofMarineBiogeneticResources，ThirdInstituteofOceanography，StateOceanicAdministration(SOA)， Xiamen361005，Fujian，China；2．[nstituteofChemicalTechnology，HuaQiaoUniversity，Xiamen361021， r肌，China) Abstract：Toinvestigatetheroleofhead—tailjoiningproteininviralinfectionandDNApackaging，thehead— tailjoiningproteinEV8fromthedeep—seathermophilicbacteriophageGVE2wascharacterized．EV8encoding genewasclonedintoprokaryoticexpressionvectorpGEX4T·2and transformedintoE．coliBL21forexpression． ThepurifiedproteinscharacterizedbySDS—PAGEandthe36kD GST—EV8proteinwasobtained．TheW estern blotresultsdemonstratedthattheEV8genewasexpressedinthe2hoursofGVE2infection，implyingthatit mightbeavirallategene．Asrevealedbyimmuno—electronmicroscopy．thegoldparticleswereobservedinthe junctionbetweenthephageheadandthephagetail．Theresultmayhelptorevealthemechanismofassembly andtranscriptionalregulationofthermophilicbacteriophage． Keywords：ther