2011年高考生物人教版第一轮精品ppt课件：DNA和蛋白质技术1.pptVIP

(1)DNA的粗提取与鉴定 (2)PCR技术的基本操作和应用 (3)蛋白质的提取和分离 (1)DNA粗提取的原理、方法和注意事项 (2)DNA的鉴定 (3)PCR技术操作及原理 (4)蛋白质提取的原理和方法 一、DNA的粗提取与鉴定 1．原理：(1)DNA和蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，如下表所示： 项目类别 NaCl溶液 酒精(体积分数95%的冷酒精) DNA 不溶 蛋白质 NaCl溶液从2 mol/L逐渐稀释的过程中溶解度逐渐增大 某些蛋白质可溶 (2)DNA对酶、高温、洗涤剂的耐受性与蛋白质的区别 类别项目 DNA 蛋白质 蛋白酶 没有影响 水解 高温 80 ℃以上才会变性 60～80 ℃会变性 洗涤剂 没影响 瓦解细胞膜(破坏膜中的蛋白质分子) 2.注意事项 (1)选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。如鸟类血细胞，其代谢旺盛的红细胞多。 (2)动物细胞的破碎较易。例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。 (3)此操作中共有三次加入NaCl溶液，浓度均为2 mol/L，目的是溶解DNA，其中第一次加入2 mol/L NaCl溶解DNA后，向滤液中加入蒸馏水，使NaCl浓度降为0.14 mol/L，目的是析出DNA，第三次加入2 mol/L NaCl是为了鉴定DNA。 (4)搅拌等动作要轻并沿同一方向，防止破坏DNA。 (5)尽量使用塑料器具，因为DNA易被玻璃制品吸附，影响最终提取量。最后提取用于鉴定时可用玻璃棒卷出。 二、用PCR技术扩增DNA片段 1．细胞内DNA复制与PCR技术比较 类别 项目 细胞内DNA复制 PCR 不同点 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 80～100 ℃高温解旋，双链完全分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 温度 体内温和条件 高温 2.PCR反应过程中几个问题的解释 (1)90 ℃以上时变性，双链DNA解聚为单链； (2)50 ℃左右时复性，引物与两条单链DNA结合； (3)72 ℃左右时延伸，Taq DNA聚合酶有最大活性，使DNA新链5′端向3′端延伸。 三、血红蛋白的提取和分离 1．方法及原理 (1)凝胶色谱法：根据相对分子质量的大小分离蛋白质。 (2)电泳法：根据分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状不同分离蛋白质。 2．实验操作程序及注意事项 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤：a.目的：除去血浆蛋白等杂质，利于后续步骤的分离纯化。b.操作时注意离心时转速要低，时间要短，至少重复洗涤三次。 ②血红蛋白的释放：蒸馏水使红细胞涨破，甲苯溶解细胞膜，使血红蛋白释放出来。 (2)粗分离——透析：除去样品中分子量较小的杂质。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 凝胶色谱操作时应注意： ①在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 ②在凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干、露出凝胶颗粒的现象。 一旦发生上述两种情况，凝胶色谱柱需要重新装填。 ③滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，不要破坏凝胶面。 ④根据红色区带的移动状况判断收集流出液的时间。 现代生物学已向两个方面发展，宏观研究的水平为生态系统水平，微观研究的水平为分子水平，对于分子的研究，其物质的提取和分离显得尤为重要。下面是物质提取和分离的相关问题，请回答： (一)DNA分子的提取和分离 (1)在提取菜花细胞中的DNA时，采用的是研磨法，为什么不能像用鸡血那样，用蒸馏水使其破裂？ _______________。 (2)在提取实验过程中用到两种浓度的NaCl溶液，说明其作用： ①2 mol/L NaCl溶液：________________； ②0.14 mol/L NaCl溶液：________________。 (3)在整个操作过程中，每100 mL血液中加入3 g柠檬酸钠的作用是：____________。 (4)鉴定DNA所用的试剂：________。 (二)血红蛋白的提取和分离 在血红蛋白的提取和分离过程中：粗分离、纯化和纯度鉴定时，都会用到缓冲溶液，其作用是____________________。 (三)不同的化学物质，其理化特性不同，提取方法也有所差异，如胡萝卜素不溶于水，易溶于________，因此可以用______________方法进行提取。 【解析】　(一)(1)作DNA分子提取的理想材料为富含DNA的细胞，动物中鸡血红细胞具有细胞核，放入蒸馏水中会使细胞涨破释放出DNA，而植物细胞中含有细胞壁不能因吸水而涨破。(2)实验过程中用到NaCl溶液，2