荧光标记8个miniSTR及其Amelogenin复合扩增体系的建立.pdfVIP

荧光标记8个miniSTR及Amelogenin复合扩增体系的建立 i ni I i n复合 荧光标记8个m STR及Ameogen 扩增体系的建立 专 业：法医学 硕士研究生：冯冬亮 导 师：刘超教授 摘要 目前，PCR-STR技术已经广泛应用于国内外法庭DNA实验室，成为个人识 别和亲权鉴定最主要的技术手段。在实际工作中，受气候、环境、物理及化学等 多种因素影响，该技术对降解检材进行STR分型时经常出现优势扩增或者大片段 基因座漏扩。如何提高降解DNA样本STR分型成功率成为国内外法医DNA专家 关注的热点。miniSTR技术通过重新设计引物，使引物更靠近重复序列，减少片 段长度，能提高降解检材STR分型的成功率。目前法医学上广泛使用的CODIS核 ,L,STR基因座等位基因数较多，片段长度跨度较大，构建miniSTR复合扩增体系 时只能同时扩增较少的基因座，一次扩增的系统效能较低。为此，寻找CODIS 十分必要。本研究筛选了11个非CODIs系统的miniSTR基因座进行单个基因座的 增体系，显示出良好的应用前景。 本研究通过查找文献及网站，合成PCR引物进行扩增，应用聚丙烯酰胺凝 胶电泳分离PCR产物，银染法显带，初步筛选了11个miniSTR基因座： 调整部分基因座的引物，合成11个基因座的荧光标记引物并进行单个基因座扩 增，产物应用毛细管电泳检测，检验了广州汉族100个无关个体的血样，获得 荧光标i58个miniSTR,KAmelogenin复合扩增体系的建立 11个基因座的群体遗传学数据。选择了其中多态性较高的8个基因座D20S1082、 D6S474、D12ATA63、D9S1 加入性别鉴定的Amelogenin基因座，经引物调整和组分优化后构建荧光复合扩 增体系。然后，应用分子克隆技术，对9个基因座的58个等位基因进行克隆， 调整各基因座等位基因的含量，制备该体系的等位基因分型标准物。最后，对该 体系的灵敏度、种属特异性、可重复性等进行评估，并对陈旧、腐败降解检材 DNA的检验能力进行研究。 荧光标记单个基因座的研究结果显示，11个miniSTR基因座均能检出分型 D9Sl D1GATAl 位基因。通过Fisher精确检验，该11个基因座的基因型数据均符合 Hardy-Weinberg平衡检验(D-O．05)。1 1 O．8 之间、多态性信息总量在0．53290．7702之间。 对常见的各类检材均能检出很好的STR分型图谱。按公式计算，该体系8个 该体系的检测灵敏度为0．05ng模板DNA，具有种属特异性和组织同一性，对肯 定亲缘关系30例父．母．子样本进行检测未发现违反孟德尔遗传规律的现象。对 50份陈旧血样的比对检验显示，该体系对降解检材有良好的扩增效果，较常规 试剂盒的分型成功率高(pO．05)。 复合体系可应用于ABI3100／3130检测平台，操作简便，分型明确，重复性好， 对腐败降解检材DNA分型的成功率较高，易于在法医DNA实验室推广应用， 在法医物证中具有较好的实用价值，可有效补充现有商品化试剂盒。 关键词：法医物证学；miniSTR；复合扩增；遗传多态性；降解DNA Ⅱ 荧光标-／,Z,8个miniSTRTA．Amelogenin复合扩增体系的建立 ofafluorescencelabeled Development multiplex lociand for8miniSTR amplificationsystem Amelogeningene Major：ForensicBiology