猪流行性腹泻病毒N蛋白单抗的制备及模拟表位鉴定.pdfVIP

摘 要 摘要 猪流行性腹泻(Porcine diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic epidemic 疫苗已普遍使用，但该病在我国仍有流行，并引起严重的经济损失。本病的流行病学特征和 临床症状与猪传染性胃肠炎无明显差别，在鉴别诊断与疫苗的应用方面存在很大的困难，因 此研制一种新型的有效的用于防治PEDV的疫苗以及鉴别诊断方法具有实践意义。 抗原表位的研究在揭示抗原分子的结构和功能、抗原抗体反应机制方面具有重要意义， 抗原表位的研究还可用于多肽疫苗和新型药物的研发。噬菌体展示技术是一种廉价且快速的 方法能够鉴定与抗体有特殊反应的抗原表位。20世纪80年代末，Stephen等研制了一种噬菌 体载体系统。近年来，利用噬菌体载体系统制各的噬菌体随机肽库逐渐应用于蛋白质的抗原 表位分析中。 本研究通过RT-PCR克隆了PEDV N蛋白的基因，构建重组质粒pET-30a-N。将重组质 导表达，经SDS—PAGE分析表达产物。结果表明N基因在原核表达系统pET-30a中获得表达， 表达的重组蛋白大小约为60KD。然后以PEDV-N蛋白为免疫原免疫小鼠，制各了4株抗PEDV 的单克隆抗体。 利用噬菌体随机12肽库对其中一株单抗3F8进行4轮淘选，获得了12个阳性噬菌体克 实筛选到的噬菌体展示多肽的空间构象与天然抗原表位相同或相似，可用于检测PEDV抗体， 也可用于表位疫苗的研究，将对猪流行性腹泻病毒诊断及表位疫苗研究具有一定的参考价值。 关键词：猪流行性腹泻病毒：单克隆抗体；噬菌体展示技术；模拟表位 Abstract ofMonoclonaltoPocine Preparation Antibody Epidemic DiarrheaVirusNProteinandIdentificationofIts Antigenicepitopes Abstract Porcine diarrheacaused diarrhea a epidemic byporcineepidemic virus(PEDV)，ishighly infectious rateof mortality exposed diseases，havingahigh sucklingpiglets．Atpresent，although thecommercializationofPEDVvaccinehasbeen diseaseisstill in widelyused，the prevalent seriouseconomic and clinical ofthisdiseaseis China,causing losses．Epidemiologicalsymptoms similartothe transmissible andthere aredifficultiesindifferential very porcine gastroenteritis andvaccine ofnovelandeffective diagnosis applicaton，therefore，thedevelopment