实验六蛋白质的定量双缩脲法测定血清总蛋白解决方案.pptVIP

实验 双缩脲法测定蛋白质浓度 实验目的 1.学习分光光度法测定的原理和方法 2.学习蛋白质含量测定的常见方法及原理 3.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法 一、分光光度法测定的原理和方法 一、分光光度法的基本原理 根据物质对光的选择性吸收（吸收光谱），对物质进行定性定量分析。 二、吸收光谱 主要分为： 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5-1000?m，主要用于有机化合物结构鉴定。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200-400nm，可用于结构鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400-750nm，主要用于有色物质的分析。 三、分光光度法的主要研究方式 1. 比较吸收光谱曲线 2. 比较最大吸收波长 蛋白质的最大吸收波长为280nm， 核酸的最大吸收波长为260nm。 3. 比较吸光度的比值 纯DNA 四、分光光度仪的工作原理 五、分光光度仪进行定量的原理 Beer-Lambert（比尔）定律： T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=εCL 其中：T为透光率；A为吸光率；I0为入射光强度；I为透射光强度； ε为摩尔消光系数；C为溶液浓度；L为溶液光程的厚度 六、定量的常用方法 （1）标准曲线法 　　　　　　　　　　　　　　　　　 标准曲线与样品的测定条件必