实验一细胞培养技术解决方案.pptVIP

1.培养细胞的生长方式 ①贴附生长： 必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞。 ②悬浮生长： 于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。 3.细胞的生长条件 恒定的温度：37℃，5%CO2培养箱 恒定的湿度:培养箱中有水盘 等渗环境：培养液提供 营养物质：培养液提供 无污染：包括微生物的污染和杂质的污染 要求使用纯水，并对所有和细胞接触的物品都要清洗干净并灭菌，培养液中还要加入青链霉素，操作在无菌环境下进行 培养用器皿：培养皿，培养瓶等 气体：培养器皿并非完全密闭的，细菌不能通过，气体可以 尽量恒定的pH值：NaHCO3与CO2形成缓冲对。5% CO2 。 各种操作液：如胰酶，EDTA，PBS等。 此外还要对细胞状态进行观察和监测（倒置显微镜）。 五、实验准备工作 1.实验器具及设备： 超净工作台，压力蒸汽消毒器，电热干燥箱，滤器，酸缸 CO2培养箱 倒置显微镜 液氮罐 自动双重纯水蒸馏器，纯水仪 耗材：细胞培养瓶，细胞培养板，细胞冻存管 超净工作台 CO2培养箱 细胞培养瓶 2.常用器皿清洗 玻璃器皿用自来水浸泡、洗涤剂刷洗、烘干、浸酸（24小时）。 流动的自来水洗10遍，蒸溜水冲洗3次，三蒸水或纯净水洗1次，180℃干热灭菌4h-6h。 塑料及橡胶制品等，超声波清洗3次，121℃高压湿热灭菌15min,烘干备用