《基因工程》释疑.docVIP

《基因工程》释疑 学生：基因工程就是遗传工程吗？ 老师：两者不能等同。基因工程是把一种生物的基因转入另一种生物体中，使其产生人类需要的基因产物，或者让它获得新的遗传性状。而遗传工程是指把一种生物的遗传物质（细胞核、染色体、DNA等）转移到另一种生物的细胞中，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。所以，基因工程是狭义的遗传工程。 学生：基因工程中工具与工具酶的区别是什么？ 老师：基因工程的工具是指限制性核酸内切酶（简称限制酶）、DNA连接酶和载体（又叫运载体），它们是基因工程的技术保障。基因工程中的工具酶仅指限制酶和DNA连接酶，不包含载体。 学生：限制酶和质粒都是只存在于细菌中吗？ 老师：不是。虽然教材中多次以细菌质粒为例（最常用的质粒是大肠杆菌的质粒），但除了细菌 老师：迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。 微生物中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解掉。微生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基（A、C）上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管微生物中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 学生：限制酶所识别的序列有什么特点？ 老师：限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的（即有回文结构）。如EcoRI的酶切（见右图）。 学生：分析限制酶的切割作用有什么一般方法吗？ 老师：有。先将告知的单链变双链，明确识别序列及其碱基对数，然后根据切点画出黏性末端，对不同限制酶的末端进行比较作出答案。如：下面是5种限制酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图（箭头表示剪切点、切出的断面为黏性末端）。 限制酶1：—↓GATC— 限制酶2：—CATG↓— 限制酶3：—G↓GATCC— 限制酶4：—CCGC↓GG— 限制酶5：—↓CCAGG— 下例叙述正确的是（ ） A．限制酶2和4识别的序列都包含4个碱基对 B．限制酶3和5识别的序列都包含5个碱基对 C．限制酶1和2切出的黏性末端相同 D．限制酶1和3切出的黏性末端相同 解析： 限制酶的种类 识别序列 碱基对数 黏性末端 限制酶1 —↓GATC — — CTAG↑— 4 — GATC— —CTAG — 限制酶2 — CATG↓— —↑GTAC — 4 —CATG — — GTAC— 限制酶3 —G↓GATCC— —CCTAG↑G— 6 — GATC— —CTAG — 限制酶4 —CCGC↓GG— —GG↑CGCC— 6 ———GC ——— ——— CG——— 限制酶5 —↓CCAGG— — GGTCC↑— 5 — CCAGG— —GGTCC — 故，本题正确答案为D。 学生：限制酶的组合使用（双酶切）有什么优势？ 老师：用同一种限制酶切割目的基因和载体后，目的基因和载体两端具有相同的黏性末端，这样的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有、、三种。EcoRI的切点是G↓AATTC，当目的基因的DNA质粒用EcoRI酶切，ATT－//－,末端碱基之间能互补配对，用DNA连接酶进行连接，两个DNA片段之间连接目的基因—目的基因目的基因为了防止目的基因和质粒在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用。限制酶EcoRIG↓AATTC）和BamHI（G↓GATCC）具有不同的酶切位点————————G G――――――――CCTAG 从而可以避免不同黏性末端之间的连接： AATTC————————G AATTC————————G G――――――――CCTAG 　G――――――――CCTAG 学生：有资料说，逆转录病毒也可以作载体，那么基因工程中的载体都是DNA吗？ 老师：这个问题问得很好，说明你是一个爱阅读和思考的学生。1990年，美国研究人员对一位因缺乏腺苷脱氨酶基因而患先天性体液免疫缺陷病的女孩进行了基因治疗。其方法是首先将患者的白细胞取出做体外培养，然后用逆转