2014DNA的损伤和修复解读.ppt

1光修复 (light repair) 1） 1949年发现细菌光复活现象 可见光（最佳波长400nm）激活光复活酶，分解嘧啶二聚体 从低等的单细胞生物至鸟类都有光复活酶； 遗憾的是：高等哺乳动物和人没有！ 2）过程 2 链断裂的直接重接 DNA单链断裂是常见的损伤， 其中一部分可仅由DNA连接酶(lingase)参与直接修复。 催化二段DNA链之间3’,5’ 磷酸二酯键的形成 DNA连接酶在各类生物各种细胞都普遍存在。 修复反应容易进行 DNA双链断裂几乎不能修复。 * 缺口填补: 连接双股DNA分子中一链的缺口 双链DNA分子中双链的缺口 不能连接二分子单链DNA 3 碱基的直接插入 DNA链的AP位点能被嘌呤插入酶(insertase)识别结合，在K+存在的条件下，催化和另一条链上碱基严格互补配对的游离嘌呤插入AP位点，DNA完全修复。 嘌呤插入酶(insertase) 专一性强。不与单链DNA作用。 如果互补链上也无碱基时，该酶不工作。 使用的嘌呤原料：自由嘌呤、脱氧核苷嘌呤。 不用RNA的原料——核苷嘌呤。 4.转甲基作用： 烷基转移酶 即自杀型修复酶 将DNA上的甲基（-CH3）转移到酶分子上，酶自身被甲基化而失活。 如：Ada蛋白， 即O6-甲基鸟嘌呤-甲基转移酶(MGMT-I), 它可将DNA上6-甲基鸟嘌呤的甲基转移到自身的半胱氨酸残基上，代价是每转移一个甲基，损失一个Ada蛋白。 (二)切除修复 (excission repair) DNA损伤最普遍的修复形式。 尤其是哺乳类动物 针对多种DNA损伤： AP位点、嘧啶二聚体、链断裂、碱基烷基化等 定义：多步骤多酶参与的过程 在DNA内切酶、外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等多种酶的共同作用下，先将DNA受损的单链部位切除，然后以另一条链为模板，合成一段正确配对的碱基序列来修补缺口。 识别损伤位点 并在两侧切开 切除两切口间 核苷酸片段 DNA合成 DNA连接 核酸酶：切割核酸的磷酸二酯键。 核酸内切酶：有碱基序列特异性。 从多核苷酸链中间开始切割核酸。 产物是寡核苷酸。 核酸外切酶：有末端特异性。 从多核苷酸链5，-端或3，-端开始切割。 产物是单个核苷酸。 （1）切除修复利用的是化学能ATP，也叫暗修复。 （2）修复发生在复制前。 （3）修复的对象是亲代DNA。 * 注意 切除方式：依据修复内容不同 碱基切除修复（base excision repair，BER.） -切除的是单个碱基： 碱基丢失、错配、脱氨、环氮类甲基化 -特征：首先要N-糖苷酶识别并切除损伤碱基，留下AP位点 核苷酸切除修复（nucleotide excision repair，NER） -切除的是一段寡核苷酸 -特征：首先要核酸内切酶对DNA链损伤部位两端识别并进行切割。 碱基缺陷或错配的修复 核苷酸损伤的修复 特异切开损伤核苷酸的糖苷与磷酸间的磷酸二酯键, 切除包含AP位点核苷酸在内的小片段DNA “无嘌呤内切核酸酶”或“无碱基内切酶”。 特异切开无碱基核苷酸的磷酸二酯键使链断裂. T A ? C P P P P AP内切酶 原核生物中与切除修复有关的基因有三种，称为uvrA,uvrB,uvrC。 其产物现已研究清楚， UvrA,UvrB,辨认及结合DNA损伤部位的蛋白质， UvrC有切除作用，此外还需要解螺旋酶的协助，将损伤部位除去。 着色性干皮病（xeroderma pigmentosis，XP） 是较早发现的一种遗传病，其发病机制与DNA损伤切除修复存在缺陷有关，患者皮肤和眼睛对太阳光特别是紫外线十分敏感，身体暴光部位的皮肤干燥脱屑，色素沉着，容易发生溃疡，皮肤癌发病率高，常伴有神经系统障碍，智力低下等。 研究其发病机制时，发现一些XP病相关基因， 称为XPA、XPB、XPC等。这些基因的表达 产物与Uvr类蛋白有同源序列，在切除修复过 程中参与辨认和切除损伤DNA部位的作用, XP病人是由于XP基因有缺陷，不能修复 紫外线照射引起的DNA损伤。 (三)重组修复(recombination repairing) 当DNA损