临床化学检验中干扰物质筛选.docVIP

临床化学检验中干扰物质的筛选 1.常见干扰物质及其干扰机制 对临床化学检验有潜在干扰作用的物质主要有如下几种：①患者病理情况下的代谢产物，如多发性骨髓瘤患者体内的异常单克隆免疫球蛋白等。②患者治疗过程中使用的药物，如非肠道维生素、血浆扩容剂、抗凝剂等。③患者摄入的物质，如酒精、营养品、饮料等。④样本在处理过程中的添加物，如抗凝剂、防腐剂、稳定剂等。⑤样本在处理过程中由操作者引入的污染物，如护手霜、手套粉尘等。⑥样本基质本身，如与理想新鲜血清不同的物理和化学特性等。 上述干扰物可以通过多种方式干扰分析过程：①物理作用：干扰物具有与分析物相似的物理特性，如颜色、光散射（光吸收）、电极响应、洗脱位等。②化学作用：干扰物可以竞争试剂、抑制指示反应、改变分析物形态等。③酶抑制作用：干扰物可以螯合酶活化所必须的金属离子、结合酶催化部位、氧化酶分子内所必须的巯基等。④非特异性：干扰物能与分析物以相同的方式与试剂进行反应，在免疫化学方法中干扰物能和抗体发生交叉反应等。⑤水的取代：样本中非水溶性物质（蛋白质、脂质）通过取代水溶性血浆体积从而影响分析物测定。⑥基质效应：干扰物可以改变样本基质的物理特性，如粘性、表面张力、离子强度等。 2.干扰物质筛选实验 EP7-A文件阐述了两种基本方法评价检测系统或分析方法对干扰的敏感性，第一种方法是比较测试混合液和控制混合液之间是否存在偏差，称为配对差异实验；第二种方法是用高特异性对比方法作比较，评估被选择的患者样本的偏差，称为用患者样本评估干扰实验。两种方法都有各自的优点，但也有其内在局限性，因此建议一起合并使用以相互补充。 3.配对差异实验 3.1选择合适的分析物浓度 实验过程中改变分析物的浓度，干扰物所产生的干扰作用可能会有差异，因此实验者应在分析物的两个医学决定水平处对干扰物的干扰作用进行评估，否则实验可能会得出错误的结论。EP7-A文件的附录B给出了CLSI工作组推荐的分析物测试浓度，如选择白蛋白为分析物时，上述两个医学决定水平分别为35g/L、50g/L，不同的分析物有不同的要求，实验者在实验时可以参考EP7-A文件。 3.2选择合适的干扰物浓度 在测定分析物过程中，不同浓度的干扰物所产生的干扰作用有一定的差异，因此在进行配对差异实验时有必要选择合适的干扰物浓度。选择原则如下：①药物和代谢物：血清、血浆、全血等样品应选择该药物一个治疗剂量后急性峰浓度的3倍作为测试浓度，或选择已知的最高预期浓度。如果预期的血药浓度未知，则可以假设药物均匀分布于5L溶剂中，选择该浓度的3倍作为测试浓度。②内源性物质：应已知该物质在患者群体中的最高浓度，选择该浓度作为测试浓度。③抗凝剂和防腐剂：血清、血浆、全血等样品应选择抗凝剂或防腐剂生产商推荐添加浓度的5倍作为测试浓度。④饮食物质：血清、血浆、全血等样品应选择该饮食物质最大预期浓度的3倍作为测试浓度。此外，由于不同的机制，干扰物对分析物产生负效应的同时也有可能产生正效应，如血红蛋白既具过氧化氢酶活性，又在可见光范围内强烈的光吸收，为避免在实验过程中这种正负效应相互抵消的可能性，实验者最好在干扰物的两个不同浓度水平处进行测试。 3.3确定临床可允许的最大干扰范围 临床可允许的最大干扰范围可根据该分析物测定时的总允许误差（可参考美国临床实验室修正。 如果备择假设说明了干扰的方向，如α-酮基丁酸。式中：为标准正态分布资料双侧100(1-α)％的百分位数为标准正态分布资料侧100(1-α)％百分位数为标准正态分布资料功效为100（1-β）%时相对应的百分位数，、、均可通过查EP7-A文件表1获知；s为批内重复测定结果之间的标准差；dmax为临床可允许的最大干扰范围。由于重复次数必须为整数，所以单侧检验、双侧检验计算的结果均应四舍五入。 3.5实验样本的准备 3.5.1 基础混合液 首先应准备基础混合液，具体步骤及注意事项如下：①从近期未用药的健康个体获取合适类型的新鲜样本。含有防腐剂、稳定剂的控制液具有与人新鲜血清不同的干扰作用，故此类标本在本实验中是禁用的。②考虑测试每个分析物需要的样本体积、分析物的数目、实验重复测试的次数等因素，收集足够量的混合液。③确定基础混合液中分析物的浓度，并用合适的纯物质调整使其达到医学决定水平，但是在这过程中实验者应避免引入其他物质。 3.5.2干扰物原液 按如下操作准备干扰物原液：①获得一定纯度的干扰物或化学结构与干扰物在体内循环时最接近的物质。如果是研究药物对生化检验的干扰，则必须注意到药物内可能含有赋形剂、防腐剂、杀菌剂、杀真菌剂、抗氧化剂、着色剂、调味品、金属氧化剂、填充物等，这些物质中的每一种都有可能对生化检验过程中产生干扰。②选择一种能充分溶解干扰物的溶剂。查阅化学物理手册或Merck 索引，了解干扰物在这些溶剂中的溶解度，并确