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吸入性及食物性过敏原特异性IgE 抗体检测试剂盒的标准操作规程 1 目的：保证特异性IgE(sIgE)试验的正确操作，保证检验结果的准确可靠。 2 适用范围：临床免疫实验室 3 项目名称：吸入性及食物性过敏原特异性IgE 抗体检测试剂盒 4 项目方法：欧蒙印迹法 5．原理：采用免疫印迹法原理。 5．1 经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行温育。如果样本阳性，IgE 类特异性抗体与相应的过敏原结合。 5．2 在洗涤之后，加入酶标单克隆的抗人IgE 抗体（酶结合物）进行第二步温育，以形成复合物。 5．3 在孵育之后，冲洗掉未结合的酶-抗-IgE，然后加入底物液，发生颜色反应。 5．4 终止反应之后，风干判读结果。 6．标本种类及收集、运送要求： 6．1 病人准备：要求患者在安静状态下；晨起的精神、体力、情绪等因素的影响较小，是标本采集的最佳时间；抽取肘部静脉血或毛细血管血。 6．2 标本种类：人血清或者EDTA、肝素或柠檬酸抗凝血浆。 6．3 标本稳定性：待测样本于2-8°C 条件下通常可保存14 天。稀释后的样本应在同一个工作日内检测。 6．4 标本稀释：患者样本不需稀释，直接检测。 6．5 标本容器：一般用真空采血管中的血清促凝管（红色头盖）或抗凝管（紫色或绿色头盖）。 6．6 标本最小用量：血清最小用量 1ml。 6．7 标本运送：标本采集于真空采血管后应尽快送实验室分析，物流系统可加快标本传递速度。若标本不能及时转运到实验室，应将真空采血管内的标本置冰瓶或冷藏箱内，运送过程中应避免剧烈震荡。当天无法运送的标本应分离血清后冷藏。 7．试剂： 7．1 来源：欧蒙公司. 7．2 规格： 16*1人份/盒 7. 3 试剂盒组成和代号： 主要组分：16 人份的试剂盒 成分 规格 标识 包被过敏原的检测膜条：ts20, w1, w6, ds1, h1, e1, e2, i6, ms1, u80, f1, f2, f13, f14, f27, f88, fs33, fs34, f24, f23, CCD 16x1 STRIPS 酶结合物：碱性磷酸酶标记的抗人IgE（小鼠），直接使用 1x20ml CONJUGATE 通用缓冲液：10 倍浓缩 1x100ml BUFFER 10x 色原/底物液：NBT/BCIP(四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲 哚-磷酸盐)，直接使用 1x30 ml SUBSTRATE 温育盘 2 x 8 槽 TRAY 塑料封膜 1 张 产品说明书 1 份 7．4 储存和稳定性：2-8°C 保存，不要冰冻。未开封前，试剂盒可稳定至所标示的有效期。已稀释的缓冲液必须在一个工作日内用完。 7．5 试剂的准备和稳定性： 7．5．1 试剂在使用前均应在室温（18-25℃）平衡30分钟左右。 7．5．2包被过敏原的检测膜条：直接使用。为防止膜条发生冷凝，只有当膜条平衡到室温后才可打开包装。取出膜条后应立即密封好原包装并将其保存于2-8°C。 7．5．3酶结合物：直接使用。使用前充分混匀。通用缓冲液：10 倍浓缩。在稀释前应充分混匀。用干净的吸管从瓶中吸取需要量用蒸馏水或去离子水1:10 稀释。由于欧蒙印迹法中使用了特殊的膜条，因而需要用已稀释的通用缓冲液稀释患者样本和清洗检测膜条。如需温育一条检测膜条，可取5ml 浓缩缓冲液用45ml 蒸馏水或去离子水稀释。稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。 7．5．4底物液：直接使用，因对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。 7．6 注意事项： 7. 6. 1 本检测试剂仅用于体外诊断。 7. 6. 2 试剂盒中部分试剂含有毒性的叠氮钠，应避免接触皮肤。 7．7 废物处理：病人样本，质控血清和温育过的膜条必须作为潜在传染源处理，其余试剂如果没有特殊官方规定不需要单独处理。 7．8 生物安全级别：按Ⅱ级执行。 8．其它辅助用品： Tip 、判读软件Eurolinescan。 9．使用仪器：EUROBLOTMASTER全自动蛋白印迹仪。 10.操作步骤： 仪器操作按《全自动蛋白印迹仪操作标准化规程》进行，只需分离血清上机、加样，包含温育、洗涤等各项操作均由仪器自动进行。 11．质控品的使用水平和频率： 质控品：每根膜条上均包含质控品，每个病人每次试验均有质控。 12．参考区间： 0.35 kUA/l 13．报告结果： 13．1 标本检测结果手工输入中文电脑，数据经操作者初次审核，经小组负责人或中级职称以上的授权代理人再次审核后发出。 13．2 报告样式：欧蒙特异性IgE单位（kUA/l） 欧蒙特异性IgE用于测定特异性IgE抗体，测定值以kU/l为单位。≥0.35kU/l的值代表特异性过敏原抗体的相对浓度累进增加。0.35k