分子发光荧光磷光解析：.pptVIP

* 4). 荧光熄灭 （fluorescence quenching） 什么叫荧光熄灭 什么叫荧光熄灭剂 常见的荧光熄灭剂有哪些 避免荧光熄灭的措施 荧光熄灭的应用 * 荧光熄灭剂 （quenching medium） 荧光熄灭，又称荧光猝灭，是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用而引起荧光强度降低或荧光强度与浓度偏离线性关系的现象。 引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。 如，卤素离子、重金属离子、氧分子以及硝基化合物、重氮化合物、羧基和羰基化合物均为常见的荧光熄灭剂。 * 引起荧光熄灭的原因 碰撞→损失能量 作用→生成不发光的配位化合物 溶解O2→荧光物质氧化/ O2顺磁性→体系间跨越→激发单重态的荧光分子转变至三重态 重原子Br/I→体系间跨越→三重态 荧光自熄灭：荧光物质浓度过大时，增加荧光分子间碰撞几率而产生的荧光熄灭现象。 (浓度限量1?g~1mg/ml) * 避免荧光熄灭的措施： （1）选择合适的溶剂 （2）溶液浓度在合适的范围 荧光熄灭法(fluorescence quenching method)：利用荧光物质荧光强度的减弱与荧光熄灭剂的浓度呈线性关系测定荧光熄灭剂含量的方法。 * 5). 散射光（Scattering light）的干扰 散射光 选择适当的激发波长消除拉曼光的干扰 瑞利光（波长与入射光相同） 拉曼光（波长与入射光不同） * 硫酸奎宁在不同激发波长下的荧光(a)与拉曼光谱(b) 荧光光谱 拉曼光谱 瑞利光320nm 拉曼光360nm 拉曼光400nm 荧光448nm 激发320nm 激发350nm 瑞利光350nm * 荧光分光光度计 荧光分光光度计工作原理及仪器结构框图 光源 氙灯 激发单色器 样品池 光电倍增管 数据处理 仪器控制 发射单色器 问题：荧光分光光度计与紫外-可见分光光度计有何异同点？ * 紫外-可见分光光度计: 光源 样品池 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 荧光分光光度计: 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 * 4 荧光分光光度计 元件与紫外/可见分光光度计类似,但有三处不同: 光源更强(高压氙灯、汞-氙弧灯或激光器)； 两个单色器； 检测器与光源垂直； 试杯(四面抛光)或平面多格样品板。 * 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 荧光分光光度计 样品池 I0 It I0 It IF,p 1. 形状：紫外-可见分光光度计的吸收池两面透光 荧光分光光度计的样品池四面透光 波长范围 2. 使用注意事项 容易破碎 沾污问题 * 例 题 在测量分子荧光强度时，要在与入射光成直角的方向上进行测量，这是由于： A 荧光是向各个方向发射的，为了减小透射光的影响 B 只有在与入射光成直角的方向上，才有荧光 C 荧光强度比透射光强度小 D 荧光的波长比入射光波长长 * 5 磷光分光光度计 结构和荧光分光光度计相似，但是试样皿是一只杜瓦瓶，以二乙醚/异戊烷/乙醇=5/5/2作溶剂(称作EPA混合溶剂)。夹层中充液氮，冷却至-196℃时EPA成为清澈透明的玻璃状体。 * 6. 测定方法－荧光光谱的制备 ①测定UV-Vis吸收光谱:分析物制成溶液，扫描获得UV-Vis光谱。从最大吸收波长中选择λmax作为激发光波长（λex）。 ②测定荧光发射光谱:固定激发光波长λex(通常先试用λmax)，设定发射光谱范围(通常起始波长大于λex，再延伸100nm左右)，扫描获得发射光谱。从中得到最大荧光发射波长λem。 ③测定荧光激发光谱:固定荧光发射波长λem，设定激发光谱范围(通常小于λem 100nm左右)，扫描获得激发光谱。从中得到最大荧光激发波长λex。如果λex选择不当，得到的荧光光谱将会有很大差异。 * ⑴ 荧光光谱的定性信息 　 ①荧光光谱： 包括荧光激发光谱及荧光发射光谱 　　　 ②最大荧光激发波长：lex 　　　 ③最大荧光发射波长：lem 　 ④荧光寿命：t 7 . 应 用 * F=2.3K?I0ECl =KC 荧光分析法仅适用于稀溶液的测定 满足定量分析条件： ECl≤0.05→F∝C 降低荧光自熄灭（内部猝灭）作用 灵敏度高（放大信号） ? 荧光分析是目前灵敏度最高的分析方法之一，用于微量及超微量分析。如：体内药物分析、食品分析、环境污染物痕量分析等。 ⑵ 荧光或磷光光谱的定量分析 * 1. 直接比较法 ： 如果荧光物质溶液的工作曲线通过原点，就可选择其线性范围，用直接比较法进行测定： * 2. 工作曲线法：