分子生物学研究方法(上)解析：.pptVIP

PCR的基本原理 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 1.6.1 基因组文库 基因组文库: 含有某种生物全部遗传信息的重组DNA分子的克隆总体。 基因组文库的规模：N = ln（1–p）/ln（1-f） 上式中，N：克隆数；p：某DNA片段在基因文库中出现的概率；f：插入片段的平均大小与基因组大小的比值。 1.6.2 cDNA文库 从一定生长阶段的某种细胞或组织分离得到的总mRNA反转录成总cDNA，插入到克隆载体，然后再将cDNA重组子转移到宿主细胞中进行增殖。通过上述方法所获得的无性繁殖系即为cDNA文库。 cDNA文库构建步骤 与cDNA克隆或文库构建有关的几个问题 cDNA的概念：第一链cDNA；cDNA基因；cDNA编码序列。 mRNA质量的检测：根据甲醛变性胶电泳的rRNA的带型进行判定。 mRNA的纯化：0ligo（dT）-纤维素柱层析；抗生物素蛋白磁珠吸附法。[生物素标记0ligo（dT）]。 cDNA重组子的形成：在cDNA双链末端或添加同聚物单链尾巴，或添加含适当限制酶识别序列的“接头”（linker），以便与适当载体重组。 Trametes gallica总RNA的甲醛变性电泳 mRNA质量的检测 mRNA的纯化 Promega Poly（AT） tract mRNA Isolation System分离Poly(A)RNA：将用生物素标记的Oligo（dT)与总RNA共温育；加入包被有抗生物素蛋白的微磁球；用磁场吸附Oligo(dT)-mRNA。 cDNA文库构建图解 1.7 分子标记技术 遗传标记: 是基因型的特殊的易于识别的表现形式，它是生物分类学、遗传学、育种学、物种起源与进化等研究的主要技术指标之一。包括形态标记、细胞学标记、生化标记和分子标记等。 分子标记: 分子标记指能反映生物个体或种群之间基因组DNA差异的DNA序列。分子标记广泛存在于基因组的各个区域，数量大，多态性高。分子标记大多以电泳谱带的形式表现出来。是继形态标记、细胞标记和生化标记之后发展起来的一种新的较为理想的直接从DNA水平上进行遗传分析的遗传标记。 应用 种质资源研究、品质纯度鉴定、构建遗传连锁图、基因定位标记辅助选择、比较基因组研究、基因克隆（图位克隆）、生物起源、进化、医学及法医学等。 现有的DNA分子标记技术大体上可分为2类，一类是以分子杂交为基础的分子标记，其代表性技术是RFLP；另一类是以PCR为基础的分子标记，如RAPD、SCAR、SSR、SSLP、ISSR、AFLP、STS、EST、SSCP和SNP等。 每种分子标记技术都有其优缺点，可根据实验材料和研究目的的不同灵活选用。 DNA分子标记类型 主要的DNA分子标记 英文缩写 英文名称 中文名称 RFLP Restriction fragment length polymorphism 限制性片段长度多态性 STS Sequence tagged site 序列标签位点 RAPD Random amplified polymorphic DNA 随机扩增多态性DNA SCAR Sequence-characterized amplified region 序列特异性扩增区 AFLP Amplified fragment length polymorphism 扩增片断长度多态性 SSR Simple sequence repeat 简单序列重复 SSLP Simple sequence length polymorphism 简单序列长度多态性 ISSR Inter-simple sequence repeats 间简单序列重复 SSCP Single-strand conformation polymorphism 单链构象多态性 SNP Simple nucleotide polymorphism 单核苷酸多态性 (1) RFLP (限制性片段长度多态性) 不同个体基因组内的核苷酸序列因某种原因产生碱基突变