【医学课件】血清丙氨酸氨基转移酶（alt）测定.pptVIP

* 【目的要求】 1、掌握丙氨酸氨基转移酶测定的基本原理。 2、学习酶活性的测定方法。 3、了解丙氨酸氨基转移酶在临床诊断中的意义。 实验四 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定 * 【实验原理】 * * * 1、取四支试管，标号，按下表操作（单位：mL) ? 标准管 标准空白管 测定管 测定空白管 丙酮酸标准液 0.1 — — — 新鲜血清 - - 0.1 0.1 底物液 0.5 0.5 0.5 -? 0.1mol/L磷酸缓冲液， pH=7.4 — 0.1 — — ? 混匀后，前三管37℃水浴准确保温30min — 2,4-二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 底物液 — — — 0.5 ? 混匀后，37℃水浴准确保温20min 0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 * 2. 静置10min，在520nm下比色，以蒸馏水校正零点，读取各管管的吸光度值（A）。 * 【计算】 Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── 0.1mL 血清所产生的丙酮酸数（ μg）= A测定-A测定空白 A标准-A标准空白 ×10 本法ALT活性单位定义是：每mL血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作用30 min，每生成2.5 μg丙酮酸为1单位(U)。 ALT活力单位（u) = 0