【医学课件】琼脂糖凝胶电泳鉴定pcr产物.pptVIP

* 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 【目的】 掌握DNA琼脂糖凝胶电泳检测的原理，熟悉其方法 。 * 琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。 D-半乳糖 3,6-脱水-L-半乳糖 【原理】 * * PCR产物混合荧光染料（SYBR Green I)以及指示剂（溴酚蓝）后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在电泳冲液中电泳，根据DNA片段的大小、构型分离成不同区带，在紫外光下观察。 【原理】 * SYBR Green 能结合到双链DNA的小沟部位 SYBR Green只有和双链DNA结合后才发荧光 琼脂糖凝胶不吸收紫外光 紫外灯下，结合有SYBR Green的PCR产生发出荧光 SYBR Green * SG SG SG SG SG SG SG 5’ 3’ 5’ 3’ Emission Excitation SYBR Green结合的数量与DNA含量成正比 ——定量 * DNA的片段大小与相对迁移率相关 ——分子量 * 【试剂与器材】 1.PCR产物、荧光染料（SYBR Green) 2.样品缓冲液（含溴酚蓝） 2.微量加样器 3.电泳仪、电泳槽 4.琼脂糖 5.TBE电泳缓冲液（pH8.0） * 【操作】 制胶 适量琼脂糖 适量电泳缓冲液 琼脂糖胶溶液