教学课题土壤中尿素细菌的分离分解纤维素的微生物的分离教程分析.pptVIP

（一）土壤取样：资料一 1、取样环境： 富含纤维素的环境中，如多年落叶形成的腐殖土、多年积累的枯枝败叶等环境，滤纸埋入图土壤（深10cm左右）30 d左右，从已腐烂的滤纸上筛选。 2、原因： 由于生物与环境的相互依存，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 滤纸埋入土壤是人工设置纤维素分解菌的事宜环境，使纤维素分解菌相对密集含量提高；埋入深度约为10cm左右。 旁栏思考:如果找不到合适的环境，可将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。 旁栏思考:为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌 由于生物与环境的相互依存，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 （二）选择培养：资料二 资料二：在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上之前，通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需微生物。请分析旁栏培养基配方，回答问题： （二）选择培养：资料二 1.选择培养的目的： 　　增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 2.选择培养基： （1）特点：以纤维素作为主要碳源（唯一碳源） （2）作用：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 ①适合于纤维素分解菌的生存并选择增殖提高浓度； ②抑制其他微生物的增殖使其浓度降低或不能增殖 　　参照选择培养基的比例配置，回答下列问题 （1）旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 是液体培养基；原因是配方中无凝固剂，液体培养基有利于微生物与营养物质充分接触，有利于培养增殖（此处目的不是为了形成菌落，而是侧重于培养增殖浓度提高） 2.选择培养基： （3）你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？ 用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照 预期结果： ①牛肉膏蛋白胨培养基：多种微生物可以增殖， 纤维素分解菌的浓度不会提高； ②选择培养基：其他微生物浓度降低，纤维素分 解菌浓度提高，得到较好的实验效果 （2）这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 有；碳源是纤维素，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖 3.选择培养的操作方法： 　　在腐殖土、枯枝败叶、腐烂滤纸取土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上（如无摇床，可用定时人工摇晃锥形瓶的办法），在一定温度下振荡培养1～2天，直至培养液变浑浊（分解纤维素的微生物比例增大） 。吸取一定的培养液（如5ml），转移到另外一瓶新鲜的选择培养液中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。可重复选择培养增加纤维素分解菌浓度使之更高；如样品中纤维素分解菌浓度较高，选择培养可不进行。 旁栏思考：为何选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 1、可使能适应选择培养基的微生物得到迅速繁殖；2、不适应选择培养基的微生物的繁殖被抑制； 因此可以起到“浓缩”的作用 旁栏思考：本实验流程与课题2中实验流程有何异同？ 差异 课题2：菌液直接涂布在以尿素为唯一氮源的固体 选择培养基上，直接分离获得菌落； 本课题： 通过液体选择培养基，使纤维素分解菌 得到增殖浓度提高后，再将菌液涂布在纤维素 鉴别（刚果红）培养基上获得菌落。 相同：其他步骤两者基本相同 　　按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到106 （三）梯度稀释： 将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在CR鉴别培养基上，30℃倒置培养 （四）取样涂布： 尿素分子的立体结构 （一）筛选菌株 水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌 选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 （二）统计菌落数目 统计菌落数目的理论依据： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。 说明设置重复组的