临床检验——概论分析报告.pptVIP

1）抗凝原理： 与血中钙离子结合成螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。 1、乙二胺四乙酸盐 （EDTA-Na2,EDTA-K2） 2）应用： ①适用：多项血液学检查， 尤其是血小板计数 特别适用于 全血细胞分析 血细胞比容测定 ②不适用：凝血象检查和血小板功能检查 因为：EDTA影响血小板聚集 2、草酸盐 1）抗凝原理： 溶解后解离的草酸根与血中钙离子结合 成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血作用。 2）应用：溶解度好、价廉 ①适用：一般血液学检查 ②不适用：凝血象检查 因为：▲对凝血V因子保护差 ▲形成的草酸盐沉淀影响自动凝血仪 3、肝素 1）抗凝原理：抗凝机制复杂 ①与ＡT-Ⅲ结合抑制凝血活酶的形成 ②抑制血小板聚集与释放反应 ③灭活丝氨酸蛋白酶,抑制凝血酶形成 2）应用： ①适用：适用于绝大多数检查 （不影响细胞体积,不易溶血） 尤其是细胞培养和红细胞渗透脆性实验 ②不适用：不适合血液学一般检查 因为：▲易引起白细胞聚集 ▲血涂片罗氏染色有蓝色背景 4、枸橼酸盐 1）抗凝原理： 与钙离子结合成螯合物，从而阻止血液凝固。 2）应用： ①适用：血沉测定（1:4） 凝血功能测定（1:9） 输血保养液 ①含有K+、Na+的抗凝剂不能用于测定K+、Na+的标本； ②EDTA、氟化物、草酸盐等不能用于测定Ca2+的标本，因为Ca2+ 可与它们形成不溶性物质。 5、使用抗凝剂应注意： 严格掌握抗凝剂与血液的比例 血液和抗凝剂的比例过高或过低都会影响标本的质量。 血液比例过高时 (采血过量)，由于抗凝剂相对不足。血浆中出现微凝血块的可能性增加，阻塞检验仪器，影响检验指标 血液比例过低 (采血不足)，抗凝剂相对过剩对许多检验指标会造成严重影响 第四节 血液涂片制备和细胞染色 一、血液涂片制备 F:\临检视屏\末梢采血、血涂片制备.flv 二、血液细胞染色 F:\临检视屏\血涂片染色.flv 一、血液涂片制备 厚薄要适宜， 头体尾要明显， 细胞分布要均匀， 血膜边缘要整齐， 并留有一定的空隙。 引起血涂片分布不均的主要原因： 推片边缘不整齐， 用力不均匀， 载片不清洁。 染料 碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，与细胞内酸性成分结合，染成蓝色。主要用于细胞核染色。如美蓝/亚甲蓝、天青 酸性染料：为阴离子染料，能释放质子，与细胞内碱性成分结合，染成红色。主要用于细胞质染色。如伊红 二、血液细胞染色 (一)瑞氏染色法 (Wrights stain ) 1 ．瑞氏染料（复合染料） 酸性染料伊红 (E-) 碱性染料亚甲蓝 (M+，又名美蓝) 美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料 (即天青) 瑞士染液放置越久，染色效果越好。原因：越多亚甲蓝转化为天青B. 甲醇的作用：①溶解美蓝和伊红，解离为 M+和E- ； 　　　　　　②脱水作用，固定细胞形态，增强染色效果。 (一)瑞氏染色法 2 ．染色原理是染料透入被染物并存留其内部的一种过程， ①物理的吸附作用， ②化学的亲和作用， 嗜酸性颗粒——碱性——与酸性染料——粉红色； 细胞核蛋白——酸性——与碱性染料——紫蓝色或蓝色； 中性颗粒——等电状态——与伊红和美蓝——染淡紫红色。 瑞士染色原理 pI 蛋白质 pH + 伊红 (E-) pH - 亚甲蓝 (M+) 3 pH 值的影响:细胞各种成分均属蛋白质（两性电解质） 最适pH（6.4-6.8） 3 pH 值的影响: 染色所用玻片必须清洁，无酸碱污染。 配制瑞氏染液必须用优质甲醇， 稀释染液必须用缓冲液， 冲洗用水应近中性。 新鲜配制的染料偏碱，须在室温贮存一定时间，贮存时间愈久，染色效果愈好。原因：越多亚甲蓝转化为天青B. DeamGilliland 等采用吸光度比值 作为瑞氏染液的质量规格。 ( 二) 吉姆萨染色法 吉姆萨染液由天青、伊红组成。 对细胞核和寄生虫 ( 如疟原虫等) 着色较好 胞质和中性颗粒则染色较差。 复合染色法 [ 质量控制] 1 ．血涂片制备 血膜由厚到薄逐渐过度； 血膜的体尾交界部位，红细胞分布 均匀，既不重叠又互相紧靠相连。 2 ．血液细胞染色 巩固 针对血细胞比容高、血粘