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第二章  细胞工程复习 2、动物细胞培养条件 1）、无菌、无毒的环境 2）、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等） 3）、温度和PH 4）、气体环境O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） * * 细胞工程 动物细胞培养、动物细胞核移植与动物体细胞克隆、动物细胞融合与单克隆抗体 2.目的： 1.操作水平： 3.分类及技术手段： 细胞水平或细胞器水平 按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质 或获得细胞产品 植物细胞工程 动物细胞工程 植物组织培养、植物体细胞杂交 离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 幼根和芽或胚状体 植物体 脱分化 再分化 植物激素： 细胞分裂素、生长素 植物组织培养条件： 一定的营养物质以及其它的外界条件（无菌、适宜温度、PH、光照等）、植物激素、离体 一、植物细胞工程 1、植物组织培养技术(P45) 原理： 外植体 原理：植物细胞具有全能性 (1)原因：生物的每一个细胞都含有该物种的全套遗传物质,都有发育成完整个体所必需的全部基因。 (2)细胞全能性实现的条件：离体、提供营养物质、激素及其他适宜条件。 （3）全能性高低的比较：受精卵(最高)卵细胞(精子)体细胞；植物体细胞动物体细胞；胚胎干细胞其他干细胞体细胞。 二、细胞全能性 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 正在融合的原生质体 杂种细胞 愈伤组织 去细胞壁 原生质体融合 再生出细胞壁 聚乙二醇 脱分化 杂种植株 再分化 植物组织培养 酶解法 纤维素酶 果胶酶 物理方法 化学方法： 人工诱导方法 离心 振动 电刺激 原生质体融合完成的标志 2.植物体细胞杂交技术(P49) 原理 植物细胞融合 ?细胞膜具有流动性 ?植物细胞具有全能型 植物繁殖的新途径 作物新品种的培育 脱毒植物 人工种子 细胞产物的工厂化生产 包括蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料等 3、植物细胞工程的实际应用 练习：1、下图为培育“花生—大豆”杂合新品种的过程示意图，请据图回答： (1)分别得到大豆和花生的叶肉细胞后，过程①需经过酶解，其中“酶解”所用的酶通常应该包括________。其目的是要除去_____；进而得到两种植物细胞的________ 。 （2）过程②常用的物理方法是_ _______，而化学方法则常用_______（英文简称_________）。此过程之所以能够进行，主要利用的原理是________________。 纤维素与果胶酶 聚乙二醇 电刺激、电场 原生质体 细胞壁 细胞膜具有流动性 PEG （3）过程③顺利完成的的标志是：经过程②所得到的_____ _出现________。 （4）④和⑤过程实际上可以称之为_____ ____技术。其中，④是______过程，得到的细胞团块被称为________，特点是__ _______；其中，⑤是_________过程，锥形瓶内的培养基中应当含有适当比例的_______和_________以分别诱导芽和根的分化，得到的产物____ 可被制备人工种子，④ 光照。 融合原生体 细胞壁 愈伤组织 脱分化 植物组织培养 排列疏松、无特定形态的薄壁细胞 再分化 生长素 细胞分裂素 胚状体 不需要 2、植物体细胞杂交的过程是（ ） A．用酶解法去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体 B．以人工诱导法使两种不同植物的原生质体融合 C．用植物组织培养技术培养杂种细胞得到杂种植株 D．通过以上三者来完成 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 无限传代 传代培养 单个细胞 加培养液 原代培养 胰蛋白酶 剪碎 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质已改变 三、动物细胞工程 1、动物细胞 培养(P53) 特点：贴壁生长、 接触抑制 （添加一定量的抗生素） 动物血清 3、动物细胞培养的应用： 1、生产生物制品：如病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体等； 2、皮肤移植——制皮肤细胞。 3、检测有毒物质。 2、细胞核移植和动物体细胞克隆(P54) 卵细胞 Ａ Ｂ 体细胞 核移植 早期胚胎 卵裂 代孕动物C 胚胎移植 动物F 分娩 妊娠 融合后的重组细胞 卵母细胞：体积大、易操作、含有促使细胞核全能性表达的物质和营养条件。 讨论： 1、核移植过程中受体细胞是？处在什么时期？ MⅡ中期 2、最后形成的动物F与A、B、C谁像？ 3、克隆依据的原理？ 动物细胞核具有全能性 与B动物基本相同 3、细胞融合与单克隆抗体制备(P57) 效应B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单