工业用微生物菌种课用解析.ppt

本章内容 一、常用的工业微生物 二、发酵工业菌种筛选的原则与基本技术 三、发酵工业菌种改良 最常用的工业微生物 细菌 醋酸杆菌属制醋工业的菌种 乳酸杆菌 枯草杆菌 丙酮丁醇梭菌 大肠杆菌 谷氨酸棒状杆菌 假单胞菌 荧光假单胞菌 荧光假单胞菌(P. fluorescens)属于假单胞菌属rRNA I群荧光DNA同源组，是植物根际最普遍的微生物类群，具有分布广、数量多、营养需要简单、繁殖快、竞争定殖力强的特点。 荧光假单胞菌，而且许多菌株能产生几种活性物质，抗多种植物病害。 其作用机制包括：抗生素的作用、噬铁素对铁的营养竞争、有效的根际定殖等。 世界许多国家均有人报道分离到抗植物病害的荧光假单胞菌,而且许多菌株能产生几种活性物质,如抗油菜菌核病的菌株。 谷氨酸发酵机制 谷氨酸的生物合成途径大致是：葡萄糖经EMP途 径或HMP途经生成丙酮酸→再氧化成乙酰辅酶 A→然后进入TCA→再通过乙醛酸循环、CO2固 定作用→生成a-酮戊二酸→谷氨酸脱氢酶的催化及有NH4+存在的条件下生成谷氨酸 谷氨酸生产菌能够在体外积累菌体最大生长需要量300多倍的谷氨酸，研究发现：大量积累并非是当初设想的由于特异代谢途径导致，而是： 代谢调节控制； 细胞膜通透性的特异调节； 发酵条件的适合。 最常用的工业微生物 酵母菌 酿酒酵母 假丝酵母属 产朊假丝酵母 解脂假丝酵母 热带假丝酵母 毕赤酵母属、汉逊酵母属：酒精发酵工业及酿造工业的有害菌 最常用的工业微生物 霉菌 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 根霉属 德氏根霉 米根霉、小麦曲根霉 红曲霉属 紫红曲霉 最常用的工业微生物 放线菌 链霉菌属 小单孢菌属 地中海诺卡氏菌 米苏里游动放线菌 未培养微生物 定义：指迄今所采用的微生物纯培养分离及培养方法还未获得纯培养的微生物，其在自然环境微生物群落中占有非常高的比例，约为99％。 研究方法 ①模拟自然培养法: 原位培养、培养条件优化、 单细胞操作 ②宏基因组分析法 二、发酵工业菌种分离筛选原则与基本技术 （一）发酵工业菌种筛选的总趋势与要求 （二）分离筛选原理与技术 （三）应用举例 1. 菌种选择的总趋势 野生菌→变异菌 自然选育→代谢控制育种 诱发基因突变→基因重组的定向育种 解除或绕过代谢途径中的限速步骤：通过增加特定基因的拷贝数或增加相应基因的表达能力来提高限速酶的含量；在代谢途径中引伸出新的代谢步骤，由此提供一个旁路代谢途径。 增加前体物的深度。 改变代谢途径，减少无用副产品的生成以及提高菌种对高深度的有潜在毒物的底物、前体或产品的耐受力。 抑制或消除产品分解酶。 改进菌种外泌产品的能力。 消除代谢产品的反馈抑制，如诱导代谢产品的结构类似物抗性。 （二）分离筛选原理与技术 1. 筛选的指导思想 2. 分离筛选工作在实际中应用的几个方面 3. 新种分离筛选原理与技术 1. 筛选的两种指导思想 先分离纯化，再结合工艺要求进行筛选。 分离纯化同时富于筛选条件，一步得出所需菌株。 结果有两种可能： 获得适于工业发酵菌株 只获得选育所需的出发菌株 2. 分离筛选工作在实际中应用的几个方面 从被污染的生产及科研用菌中分离目的菌； 生产中长期使用的菌种的定期分离筛选 ； 从各种育种方法处理的微生物材料中分离筛选适于工业目的的优良菌株 ； 从保藏机构获取菌种 好处：经济性、指导性 从已知菌种和大自然中分离新菌株 寻找新的发酵产品的产生菌； 寻找老产品的新的优良菌株。 国际承认的中国培养物保藏单位 武汉大学的 中国典型培养物保藏中心 CCTCC。保藏了几乎所有的培养物。 国际承认的中国培养物保藏单位 中科院微生物研究所的 中国普通微生物菌种保藏管理中心 CGMCC。保藏有普通菌种。 此外，较著名的中国培养物保藏单位还有 中国微生物菌种保藏管理委员会 CCCCM——管理机构 3. 新种分离与筛选的步骤 调查研究（包括资料查阅） 试验方案设计 ? ? 含微生物样品的采集 （如何使样品中含所需微 生物的可能性大？） ? ? 样品预处理 （如何在后续的操作中使这种可 能性实现） ? ? 菌种分离 （1）含微生物样品的采集 采样时应注意的问题: 土壤微生物