4动物源性食品中喹诺酮类药物测定的标准操作程序20150629--内标法.docVIP

动物源性食品中喹诺酮类药物测定的标准操作程序（LC/MS/MS法） 1.1 范围 本操作程序规定了肉与肉制品、蛋与蛋制品、乳与乳制品及蜂产品中喹诺酮药物残留量检测的高效液相色谱一质谱/质谱检测方法。 本操作程序适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛肉、羊肉、牛奶、鸡蛋、蜂蜜等食品中恩诺沙星、沙拉沙星、氟甲喹、双氟沙星、噁喹酸、达氟沙星6种喹诺酮类兽药残留量的液相色谱一质谱/质谱法测定和确证。 表1 喹诺酮药物检出限和定量限 喹诺酮药物 恩诺 沙星 沙拉 沙星 达氟 沙星 双氟 沙星 氟甲喹 噁喹酸 检出限(μg/kg) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 定量限(μg /kg) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.2原理 动物肌肉组织、肝脏、肾脏、牛奶、鸡蛋用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲液 (pH4.0) 提取样品中的喹诺酮类抗生素，经过滤和离心后，上清液经HLB固相萃取柱净化，高效液相色谱-质谱/质谱测定，同位素内标法定量。 蜂产品用氢氧化钠溶解后，离子化的喹诺酮类抗生素用HLB固相萃取柱净化，高效液相色谱-质谱/质谱测定，同位素内标法定量。 1.3试剂 除特殊注明外，本法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水。 1.3.1柠檬酸：分析纯。 1.3.2磷酸氢二钠：分析纯。 1.3.3甲醇：色谱纯。 1.3.4乙腈：色谱纯。 1.3.5甲醇一乙腈溶液：40+60（体积比）。 1.3.6 甲酸(99%)。 1.3.7氢氧化钠：分析纯。 1.3.8乙二胺四乙酸二钠：分析纯。 1.3.9 氢氧化钠溶液（0.1mol/L）取4g氢氧化钠，溶解于1L水中。 1.3.10磷酸氢二钠溶液：0.2 mol/L。称取71.63 g磷酸氢二钠，用水溶解，定容至1000 mL。 1.3.11柠檬酸溶液：0.1mol/L。称取21.01g柠檬酸，用水溶解，定容至1000 mL。 1.3.12 Mcllvaine缓冲溶液：将1000mL0.1mol/L柠檬酸溶液(4.3.10))与625 mL0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液4.3.9)混合，必要时用盐酸或氢氧化钠调节pH至4.0士0.05。 1.3.13 EDTA-Mcllvaine缓冲溶液： 0.1mol/L。称取60.5g乙二胺四乙酸二钠（4.3.8）放人1625mLMcllvaine缓冲溶液(4.3.11)中，振摇使其溶解。 1.3.14甲醇水溶液：5%(体积分数)。 1.3.15甲酸水溶液：0.2%(体积分数)。 1.3.16喹诺酮类药物标准物质：恩诺沙星（enrofloxacin，CAS：93106-60-6）、双氟沙星（ difloxacin hydrochhride ，CAS：82419-36-1） 、沙拉沙星(sarafloxacin，CAS：98105-99-8) 、氟甲喹 (flumequinc，CAS：42835-25-6) 、噁奎酸（oxolinic acid，CAS：14698-29-4 ) 、达氟沙星(Danofloxacin，CAS：112398-08-0 )。(纯度99%)、恩诺沙星-D5（enrofloxacin-d5，CAS：93106-60-6）、噁喹酸-D5 （Oxolinic acid-d5 CAS：O857502） 。 1.3.17标准溶液 1.3.17.1标准储备液： 分别称取0.0100 g标准品(1.3.15)置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，标准储备液浓度为1mg/mL，-20℃冰箱中保存，有效期3个月。 1.3.17.2标准工作液：将以上各标准储备液(1.3.16.1)稀释，配成混合标准溶液。各组分浓度为10μg/mL，此标准工作液于4℃保存，可保存3个月。 1.3.17.3 同位素内标储备液：分别称取0.001g同位素内标标准品(1.3.15)置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，标准储备液浓度为100μg/mL，-20℃冰箱中保存，有效期3个月。 1.3.17.4 混合内标应用液（1μg/mL）：分别移取恩诺沙星-D5、噁喹酸-D5液体标准品（100μg/mL）各100μL，用甲醇定容至10mL，混匀。 1.3.17.5 混合标准系列：准确移取适量混合标准应用液（1.3.17.2）和混合内标应用液（1.3.17.4），用0.2%甲酸水溶液配制成2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L的混合标准系列，每份溶液含5.0μg/L的混合内标。（恩诺沙星、双氟沙星、沙拉沙星、达氟沙星用恩诺沙星-D5校准，氟甲喹、噁喹酸用噁喹酸-D5校准） 1.4仪器与耗材 1.4.1超高