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噬菌体效价测定及转导 姓名 学号： 系别：生命科学学院生物科学专业 班号： 实验日期：4月26日、5月3日 同组同学： 实验目的 学习噬菌体效价测定的方法 了解转导原理、学习转导实验方法 实验材料 菌种：E. coli K12 F、E. coli K12S、噬菌体裂解液 培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基、 EMB培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基 实验原理 1. 噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个 7）向每支素琼脂中接入0.5ml K12S，混匀，再分别取噬菌体裂解液0.5ml（10^0、10^-2、10^-4），加入到素琼脂中，摇匀后立刻倒在牛肉膏蛋白胨平板上。 8）培养 待平板凝固后于37 ℃，培养24hr 9）观察实验现象，并数出噬菌斑的多少，根据噬菌斑数量计算噬菌体效价 二、转导 1.点滴法 1）如上图，取两个EMB平板按照上图的轮廓添加试剂，注意接种的裂解液是未经稀释的裂解液。 2）在37 ℃下培养24h，然后置于室温下培养6d 3）观察实验结果 2.转导频率的测定 1）将S菌取0.5ml于空试管中，37℃预热10min,加入0.5ml噬菌体裂解液， 37℃继续保温10min。 用牛肉膏蛋白胨液体培养基稀释到10^-4，并注意编号 3）取0.1ml的稀释液（10^-3、10^-4）涂布在EMB平板（每种浓度对应两个EMB平板）。 37℃培养24h，并在室温下培养6d 4）观察实验结果 注意事项 素琼脂一定要保持在50 ℃ 水浴中，防止凝固 转导频率测定时一定要稀释到合适浓度后才能涂平板，保证培养后长出单菌落 实验结果及分析 噬菌体效价的测定 10^0的牛肉膏蛋白胨固体培养基中长出了霉菌、2个细菌、及1个放线菌。没有出现噬菌斑 10^-2的牛肉膏蛋白胨固体培养基中什么也没长。没有出现噬菌斑 10^-4的牛肉膏蛋白胨固体培养基中长出了霉菌、没有出现噬菌斑 实验分析：实验失败，实验平板遭到污染，可能原因是，在倒平板、涂布及接种过程中没有严格的按照规定来操作，导致了污染，也可能是接种的噬菌斑或或s菌本身就被污染了。没有长出噬菌斑，可能原因是裂解液的浓度出了问题，问了下其他组的情况，都没有长出噬菌斑，说明很可能是噬菌体裂解液出了问题，不然何以所有的组都没有长出噬菌斑呢。 转导实验 点滴法 裂解液区域没有长出任何东西，F菌区域也什么都没有长（其他组也是这样的结果），s菌区域长出了紫色的光滑菌落，在与裂解液的交界处，仍然是紫色，没有任何变化。 实验分析：此次实验做得阳性对照F菌什么也没长，说明是老师准备的F菌液本身出现了问题，而S菌与裂解液的交界没有出现不同，由上一个实验分析可以知道，是裂解液出了问题，因此肯定不会出现转导成功的现象。 2. 转导频率的测定 所有平板长的都是紫色的菌落，对光旋转也没有发现哪一个菌落有金属光泽。 实验分析：实验失败，没有发现有金属光泽的菌落，说明长的肯定不是F菌，说明没有转导成功，由第一个实验分析，我们就知道是噬菌体的裂解液出现问题，所以没有出现预期的实验现象。 实验讨论 本次试验，全部失败，究其原因有如下： 实验过程中，无菌操作不当，使得平板受到污染。 噬菌体裂解液有问题 F菌出现了问题 避开失败，我们讨论了其他问题。 1．噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个